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體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗儀

時間：2025/4/30閱讀：71
分享：
　　體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗儀
 
　　一、 儀器介紹
 
　　實驗?zāi)康模?/strong>
 
　　本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性
 
　　實驗概述：
 
　　本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細(xì)胞暴露于受試物一定時間,然后將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細(xì)胞對(trifluorothymidine,TFT)等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細(xì)胞則不敏感,在含有的選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細(xì)胞對 6-硫代(6-thioguanine,6-TG)敏感,突變的細(xì)胞則不敏感,在含有 6-硫代的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落?；谕蛔兗鋽?shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。
 
　　應(yīng)用范圍
 
　　應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
 
　　符合標(biāo)準(zhǔn)：
 
　　GB/T 15670.20-2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法第20部分:體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗》
 
　　二、試驗流程
 
　　1）細(xì)胞培養(yǎng):
 
　　選擇合適細(xì)胞系(如L5178Y、CHO)，常規(guī)傳代培養(yǎng)
 
　　2）受試物處理:
 
　　暴露于不同濃度受試物(需設(shè)陰性/陽性對照)
 
　　3）表達期:
 
　　預(yù)留足夠時間(通常7-10天)使突變表型顯現(xiàn)。
 
　　4.）突變體篩選:
 
　　TK試驗:使用(TFT)篩選TK突變體。
 
　　HPRT試驗:使用6-硫代(6-TG)選HPRT突變體。
 
　　5）克隆形成分析:
 
　　計數(shù)突變集落，計算突變頻率(突變集落數(shù)/存活細(xì)胞數(shù))
 
　　6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計:
 
　　與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。
 
　　三、注意事項
 
　　1）細(xì)胞活力控制:受試物濃度需保證細(xì)胞存活率(通常>50%)
 
　　2）代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內(nèi)代謝，(如Aroclor 1254誘導(dǎo)的大鼠肝S9)。
 
　　3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。
 
　　4）合規(guī)性:   遵循國際指南(如OECD 490、ICH S2R1)。
 
　　計算：
 
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