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上海elisa試劑盒公司|廣銳生物

人蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫分析方法

時間:2014-12-5閱讀:309
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廣銳生物-國內(nèi)高、優(yōu)Elisa試劑盒供應(yīng)商 人蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用      

人蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫分析方法目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中蛋白C(PC)的含量。
實驗原理:人蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫分析方法
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人蛋白C(PC)水平。用純化的人蛋白C(PC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蛋白C(PC),再與HRP標記的蛋白C(PC)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白C(PC)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人蛋白C(PC)濃度。
試劑盒組成:
試劑盒組成    48孔配置    96孔配置    保存
說明書    1份    1份    
封板膜    2片(48)    2片(96)    
密封袋    1個    1個    
酶標包被板    1×48    1×96    2-8℃保存
標準品:7.2 μg/ml    0.5ml×1瓶    0.5ml×1瓶    2-8℃保存
標準品稀釋液    1.5ml×1瓶    1.5ml×1瓶    2-8℃保存
酶標試劑    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
樣品稀釋液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
顯色劑A液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
顯色劑B液    3 ml×1瓶    6 ml×1瓶    2-8℃保存
終止液    3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃保存
濃縮洗滌液    (20ml×20倍)×1瓶    (20ml×30倍)×1瓶    2-8℃保存

人蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫分析方法樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.    標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為4.8μg/ ml,3.2μg/ ml ,1.6μg/ ml,0.8μg/ ml, 0.4μg/ ml)。
2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.    配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.    溫育:操作同3。
8.    洗滌:操作同5。
9.    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.    測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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