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γ-氨基丁酸（GABA）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)微板法
2023-10-7 閱讀(680)
本試劑盒僅供科研使用
γ-氨基丁酸（GABA）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
（貨號(hào)：WS6011W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 4-氨基丁酸（GABA）廣泛分布在動(dòng)植物體中。在動(dòng)物體內(nèi) GABA 幾乎只存在于神經(jīng) 組織中。在植物中如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有 G A B A， 且與植物的環(huán)境應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。 4-氨基丁酸（GABA）在堿性溶液中與次氯酸鹽和苯*反應(yīng)生成藍(lán)綠色物質(zhì)，通過(guò)檢 測(cè)該有色物質(zhì)在 645nm 波長(zhǎng)處的值，即可得出樣本中 GABA 的含量。 二、試劑盒的組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液槍、水浴鍋、離心機(jī)、研缽、蒸餾水。 四、γ-氨基丁酸（GABA）含量測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本加入研缽中，加入 1mL 提取液，在冰上進(jìn)行勻漿，12000rpm， 4℃或室溫離心 10min，取上清液待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體樣本直接測(cè)定，若渾濁則離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 645 nm。 ② 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 50 50 試劑一 30 330 試劑二 100 試劑三 200 混勻，沸水?。?/span>95-100℃）10min，冰浴至室溫，呈現(xiàn)藍(lán)綠 色顏色，若渾濁需 12000rpm 離心 5min，取澄清的 200μL本試劑盒僅供科研使用 2 至 96 孔板中，于 645nm 處讀取各管的 A 值。△A=A 測(cè)定 -A 對(duì)照（每個(gè)樣本需做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】1.若測(cè)定管的 A 值大于 0.6，則需將樣本進(jìn)行稀釋（用蒸餾水稀釋），稀釋 倍數(shù) D 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2.若 A 測(cè)定-A 對(duì)照的差值在零附近徘徊，則可增加樣本取樣量（如增至 0.2g）， 則取樣質(zhì)量 W 代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0102x - 0.0003，x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(μg)，y 為吸光值ΔA。 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算: GABA 含量(μg/g 重量)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(W×V1÷V)×D =1960.8×(ΔA+0.0003) ÷W×D 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： GABA 含量(μg/104 cell)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(500×V1÷V)×D =3.922×(ΔA+0.0003)×D 4、液體中 GABA 含量計(jì)算： GABA 含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0003) ÷0.0102]÷V1×D=1960.8×(ΔA+0.0003)×D V---提取液體積，1mL； V1---樣本加入體積，0.05mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---樣本取樣質(zhì)量； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液（2mg/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 1mL 蒸餾水溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整 標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照測(cè)定管的加樣體系操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
