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人gu胱甘肽（GSH） ELISA Kit
2024-12-9 閱讀(93)
僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。
人gu胱甘肽（GSH） ELISA Kit
說明書
JZ- W10642
【產品名稱】
通用名稱：人gu胱甘肽（GSH）定量檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱：Human glutathione ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
96T/48T
【預期用途】
僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中gu胱甘肽（GSH）的濃度。
【檢驗原理】
本試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗gu胱甘肽（GSH）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入人 gu胱甘肽（GSH）校準品和待測樣本，再加入HRP標記的人 gu胱甘肽（GSH）抗原（酶標抗原），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產生藍色產物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中人 gu胱甘肽（GSH）的濃度負相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中人 gu胱甘肽（GSH）的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
| 組分 | 數量 | 主要成分 | 開封后儲存 |
| 校準品 | 0.35ml/管 | -- | 2-8℃14天 |
| 包被微孔板 | 96T/48T | 預包被固相抗體 | 2-8℃14天 |
| HRP標記抗原 | 10mL | HRP標記的檢測抗原 | 2-8℃180天 |
| 底物液A | 6mL | 0.01%過氧化氫 | 2-8℃180天 |
| 底物液B | 6mL | 0.1%TMB | 2-8℃180天 |
| 終止液 | 6mL | 2mol/L稀硫酸 | 2-8℃180天 |
| 20×濃縮洗滌液 | 25mL | 0.05%Tween20 | 2-8℃180天 |
| 說明書 | 1份 | -- | -- |
| 自封袋 | 1個 | -- | -- |
| 不干膠 | 2片 | -- | -- |
標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL
本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
2、血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。
4、組織勻漿：用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產生，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶wan全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
操作程序
1.按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2.從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。設置標準品孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。
3.除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL。
4.用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。
6.將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
7.所有孔加入終止液50μL，在450波長的酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。
【實驗結果計算】
檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數，才是樣品的最終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內使用，過期產品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。
6、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
【產品性能指標】
1.外觀和物理檢查:試劑盒應組分齊全，內外包裝均應完整，標簽清晰，液體試劑無滲漏。各組分裝量不少于表1中要求。
2.線性: 用四參數Logistic曲線擬合（4-pl），在0.5 ng/mL – 8 ng/mL范圍內，劑量-反應曲線相關系數（r）的絕對值應不低于0.9900。
3.精密度
4.1分析內精密度:試劑盒質控品測定結果的變異系數（CV）應不大于15.0%。
4.2批間精密度:在三個不同批次產品之間，質控品測定結果的變異系數（CV）應不大于15.0%
4.最di檢出限:最di檢測濃度小于0.1 ng/mL。
5.質控品測定值: 每次檢測結果均應在允許范圍內。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹di洗手。
技術提示
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序，每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規(guī)定對待所有的廢物和污物。
