| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥ 325 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號 044
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-16 10:30:19瀏覽次數(shù)：915
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活性氧檢測試劑盒
活性氧檢測試劑盒
| 100～500次 | ￥325 |
使用說明：
1. 裝載探針
對于刺激時間較短（通常為2小時以內(nèi)）的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長（通常為6小時以上）的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。
原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。按照1∶1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1mL。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。通?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ?xì)胞20～30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
收集細(xì)胞后裝載探針：按照1∶1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬/mL，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3～5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細(xì)胞充分接觸。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞。通?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ?xì)胞20～30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
說明：僅在陽性對照孔中加入Rosup作為陽性對照，其余孔不必加入Rosup。
2. 檢測
對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測，也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
3. 參數(shù)設(shè)置
使用488nm激發(fā)波長，525nm發(fā)射波長，實(shí)時或逐時間點(diǎn)檢測刺激前后熒光的強(qiáng)弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測DCF。
