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尿酸(UA)含量試劑盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量試劑盒(尿酸酶比色法),微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 尿酸含量（尿酸酶法）檢測(cè)試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS2021W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，并通過腎臟過濾排泄到尿液中。許多腎臟疾病會(huì)影響尿 酸水平，所以尿酸測(cè)定在診斷和評(píng)估腎臟疾病中具有重要作用。 本試劑盒利用尿酸酶特異作用于尿酸，氧化產(chǎn)生的產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)的（粉）紅 色，該有色物質(zhì)在520nm有吸收峰，進(jìn)而計(jì)算得到尿酸含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 14mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 支 -20℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，再 加 1.1mL 的試劑一溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前加2mL試劑一超聲*全溶 解，即0.2mg/mL尿酸溶液，再用蒸 餾水稀釋2倍即0.1mg/mL備用。 三、所需儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、尿酸含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 液體樣品： 澄清的液體可直接檢測(cè)；若渾濁則離心后取上清液檢測(cè)。 ② 組織樣本： 取約 0.1g 組織樣本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部轉(zhuǎn)移到 EP 管中，12000rpm， 常溫離心 10min，上清液待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ③ 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。本試劑盒僅供科研使用 2 2、上機(jī)檢測(cè)： ①酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，設(shè)置溫度在 37℃，設(shè)定波長到 520nm。 ②做實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本，找出適合本次檢測(cè)樣本的稀釋倍數(shù) D。 ③所有試劑解凍至室溫，在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 標(biāo)準(zhǔn)品 10 試劑一 100 100 100 試劑二 80 80 80 混勻，37℃避光孵育 5min，于 520nm 處讀取吸光值 A1。 試劑三 10 10 10 混勻，37℃避光反應(yīng) 10min，520nm 處讀取吸光值 A2（直到 A2 值不變），ΔA =A2-A1。 【注】：1. 測(cè)定管的 A 值若超過 1，可把樣本再進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 2. 若△A 的差值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量 V1（如增至 40μL，則試劑一相應(yīng)減少， 保持總體積不變），則改變后的 V1 需代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按液體體積計(jì)算： 尿酸含量(mg/mL)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)÷V1×D =0.1×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)×D 尿酸含量(μmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)÷V1×D×106÷Mr =0.1×106÷Mr×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)×D 2、按樣本鮮重計(jì)算： 尿酸含量(mg/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo))×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.1×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白) ÷W×D 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 尿酸含量(μg/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×103×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)÷(500×V1÷V)×D =0.2×(ΔA 測(cè)定-ΔA 空白)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)-ΔA 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---尿酸標(biāo)品濃度，0.1mg/mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； V 標(biāo)---加入樣本體積，0.01mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； V---提取液體積，1mL； W---取樣質(zhì)量，g； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬； Mr---尿酸分子量，168.1。