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原代細(xì)胞培養(yǎng)體系配置方法

2019-5-22  閱讀(3247)

原代細(xì)胞培養(yǎng)體系配置方法

原代培養(yǎng)體系一般由以下四種(三種)組成:

名稱

體積

保存條件

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500ml

4℃、避光

添加劑

5ml

-20℃、避光

胎牛血清(FBS)

0-50ml

-20℃、避光

雙抗(青霉素/鏈霉素,P/S)

5ml

-20℃、避光

添加劑和雙抗通常濃度為100X(100倍工作濃度)。

血清的添加比例有0%(不添加),0.5%(2ml),2.5%(10ml),5%(25ml),10%(50ml)幾種。

次使用時先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS轉(zhuǎn)移到4℃溶解后,在滅菌后的百級潔凈等級環(huán)境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要進行過無菌處理。

首先將解凍的FBS、添加劑和雙抗進行分裝,平均分裝成5-10份,留下本次配制所需要的量,剩余的繼續(xù)放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制*培養(yǎng)基,避免反復(fù)凍融。

建議用無菌的50ml離心管盛裝配置好的*培養(yǎng)基。

原代細(xì)胞培養(yǎng)體系配置方法配制方法:在每個50ml離心管中加入①500ul添加劑、②500ul雙抗、③50×血清百分比ml的胎牛血清、④(50×(1-血清百分比)-1)ml的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子,顛倒混勻備用。

配置好的培養(yǎng)基置于4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白,易發(fā)生降解,故配置好的*培養(yǎng)基有效期僅為3-4周,請盡快使用。因此建議每次配制1-2管(50-100ml),當(dāng)然使用量大的情況下也可以適量增加配置量。

  1. S.:不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用,原因如下:

1.500ml的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大,灌裝時體積波動很大,直接加入,無法準(zhǔn)確地控制因子和血清的工作濃度。

  1. 配制好的培養(yǎng)基僅能在4℃保存3-4周,如果期間沒用完,繼續(xù)使用會影響培養(yǎng)效果。如果是-20℃保存,可以延長保存時間,但是反復(fù)凍融也會影響*培養(yǎng)基的效果。
  2. 如果使用培養(yǎng)基時由于操作失誤導(dǎo)致污染,分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。
  3. 原代細(xì)胞培養(yǎng)體系配置方法


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