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產(chǎn)品及特點(diǎn) 該酶是突變型的 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄 DNA 聚合酶，從表達(dá) Moloney Murine Leukemia Virus （莫洛尼氏鼠白血病病毒）reverse transcriptase 基因(pol 基因)的 E.coli 細(xì)胞中分離純化而得，由一個(gè)分子量為 76.1 KDa 的單亞基組成，可催化以單鏈 DNA、RNA 或 DNA：RNA 雜交鏈為模板的互補(bǔ) DNA 鏈的聚合反應(yīng)。跟野生型相比,它沒有 RNase H 活性。
1.延伸性能好，可合成長達(dá) 12.5 Kb 的全長 cDNA。
2.反應(yīng)溫度為 42℃，但在 50℃時(shí)仍有活性，70℃10 分鐘能使其失活。
3.能 以  Cy3-，Cy5-，rhodamine-，  aminoallyl-，fluorescein  等 標(biāo) 記 的
nucleotides   為底物。
4.可用于 first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension 等。
5.與 PCR 兼容，RT 產(chǎn)物可以用于 PCR 和 Real-time PCR。
6.能被金屬螯合劑，無機(jī)磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7.沒有 RNase H 活性。
規(guī)格及成分  成 份 編號 塑料袋包裝 
  MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，200U/μL 6090 50 μL（綠蓋） 
  5×RT Buffer 60905b 1 mL（本色蓋） 
  使用手冊 60905sc 1 份 
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有限期一年
使用方法 一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
  成分 加入量 
  自備 RNA 模板  
  總 RNA 100-500 ng 
  或 poly(A) mRNA 10-500 ng 
  或?qū)Ｒ坏?RNA 0.01pg-500ng 
  注意：RNA 樣品不能有基因組 DNA 污染。 
  自備引物  
  Oligo (dT)18(0.5ug/μL) 1 μL 
  或隨機(jī)引物(0.2ug/μL) 1 μL 
  或 RNA 模板專一性引物 15-20pmol

  注意：隨機(jī)引物于  RNA  模板的比例跟后得到的
cDNA  的平均長度成反比。 
  自 備 RNase-free 水 補(bǔ)水到 12 μL 
 2.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3.再嚴(yán)格按下表順序加入各成分：
5×RT Buffer 4 μL
自備 RNase Inhibitor (20U/μL) 1  μL自備 dNTP (10 mM each) 2 μL
4.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成
45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃（5
分鐘）。
5.加入 1  μL (=200 U) MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，反應(yīng)終體積為 20μL。
6.42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘， 然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，不需要純化。
二：合成建文庫用的 1st-strand cDNA
1.按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
2.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3.嚴(yán)格按下表順序加入各成分
  5×RT Buffer 4 μL 
  RNase Inhibitor (20U/μL) 1 μL 
  dNTP (10 mM each) 2 μL 
 4.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成
45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃（5
分鐘）。
5.加入 1  μL (=200 U) MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，反應(yīng)終體積為 20μL。
6.42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘， 然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以
用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃。
相關(guān)資料 儲(chǔ)存 Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 8.3)，0.1 M NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，0.1% (v/v) Triton X-100 和 50% (v/v) glycerol 。
反應(yīng) Buffer，5X：250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃)，250 mM KCl， 20 mM MgCl2，50 mM DTT。
活性定義
以 poly(rA)為模板，以 oligo(dT)12-18 為引物，在 37℃溫度下，在 10 分鐘將
1 nmol 的 dTMP 摻入到多核苷酸中所需酶量為一個(gè)單位。酶反應(yīng)條件為: 50  mM  Tris-HCl  (pH  8.3)，6  mM  MgCl2，10  mM DTT，40  mM KCl，
0.5 mM dTTP，0.4 MBq/mL [3H]-dTTP，0.4 mM polyA•oligo(dT)12-18 。純度
SDS-PAGE     考馬市亮藍(lán)染色無雜帶污染
  
 圖注: 10 μL 本產(chǎn)品在SDS-PAGE 中電
泳后染色照片。純度》99%。M 表示蛋白質(zhì)分子量對照。 
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 cDNA   鏈合成試劑盒、一管式 RT-PCR 試劑盒