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上海雅吉生物科技有限公司
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MinuteTM 凝膠中蛋白/核酸提取試劑盒
2021-9-17 閱讀(229)
MinuteTM 凝膠中蛋白/核酸提取試劑盒 目錄號 PN-019
描述：
被動洗脫和電洗脫是從聚丙烯酰胺/瓊脂糖凝膠中提取蛋白質(zhì)或核酸的常用方法。被動洗脫通常需要過夜孵 育，洗脫的蛋白濃度非常低，需要進一步濃縮。電洗脫（30- 120 分鐘）比被動洗脫快但是需要特殊的電洗脫 儀，對于分子量較大的（>70KD）蛋白無法高效提取，電洗脫液中通常含有表面活性劑和其他化學物質(zhì)會影 響下游應(yīng)用。我們的試劑盒可以快速的從凝膠中提取蛋白/核酸，無需特殊儀器，操作時間<10 分鐘。 根據(jù)凝 膠染色的方法， 洗脫緩沖液可以是含有表面活性劑的緩沖液或純凈水。 洗脫體積在 10-200ul。 多個凝膠片段 可以在一個單管中進行處理，可獲得高濃度蛋白。
應(yīng)用：
可應(yīng)用于 MALD-MS 分析，免疫動物，蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)-核酸相互作用研究等。核酸可用于 PCR 反 應(yīng)，克隆和測序等。
試劑盒組分
1. 20 個離心管柱及 2.0ml 收集管
2. 20 個微型離心管（200ul）
3. 2g 提取粉
4. 4 根微型杵
儲存：
室溫儲存
所需附加材料
臺式離心機
操作方法：
A. 從聚丙烯酰胺凝膠中提取蛋白質(zhì)
1.蛋白樣品通過 SDS-PAGE 或 2D 分離后， 凝膠可以通過正染色法如標準的考馬斯亮藍染色或 者負染色法（見下面參考文獻） 將凝膠去染色顯示目標蛋白條帶。如果凝膠用考馬斯亮藍染色， 需確保凝膠僅簡單染色 （使用最短時間顯示目標條帶， 通常不超過 5 分鐘） ， 并且需要用雙蒸 水至少沖洗 3 次。
2.用刀片從膠中切出感興趣的條帶， 并修剪掉過多的凝膠。用濾紙去除凝膠中多余的液體。 將 1-2 個凝膠切片放入提供的 200ul 管底（該管可以容納多個凝膠切片） 3.用微型杵平端添加適量提取粉（約凝膠體積的 1/4- 1/3） 到管底。根據(jù)需要添加洗脫緩沖液（見 下文）到同一管中（20ul/膠片）。將微型杵端插入管底反復(fù)扭轉(zhuǎn)減小凝膠體積使其勻漿。你 也可以用微型杵反復(fù)擠壓凝膠使其勻漿（大約需要 1-2 分鐘，微型杵是可重復(fù)使用，簡單地用 蒸餾水沖洗， 用紙巾擦干） 。 繼續(xù)加入按照 20-50ul/切片洗脫緩沖液到管中， 確保洗脫緩沖液可 以沒過凝膠勻漿。蓋上管子， 在 PCR 儀中， 94℃孵育 5- 10 分鐘。渦旋震蕩幾下， 繼續(xù)孵育 5- 10
分鐘。延長孵育時間會增加蛋白產(chǎn)量。也可以蓋上蓋子 4℃過夜孵育。
4.打開 200ul 離心管和接收管管蓋， 用刀片或剪刀將蓋子全部修剪掉， 將離心管柱套入接收管后， 將 200ul 離心管開口向下插入離心管柱套管中，離心機最高轉(zhuǎn)速離心 2 分鐘。棄掉離心管柱， 保存接收管中洗脫的蛋白即可。
B．瓊脂糖凝膠中的核酸提取
1. 用刀片切出感興趣的條帶并修剪掉過多的凝膠。
2.將切下的膠片放入提供的 200ul 管中。加入加適量提取粉（約凝膠體積的 1/4- 1/3， 見上面） 到
管底。
3.用微型杵扭轉(zhuǎn)研磨膠片減少體積使其勻漿如上述。 用刀片或剪刀將 200ul 離心管和接收管蓋子
全部修剪掉。將 200ul 離心管開口向下插入離心管柱套管中，離心機最高轉(zhuǎn)速離心 1 分鐘。棄 掉離心管柱，保存接收管中洗脫的核酸即可。
洗脫緩沖液的選擇
洗脫緩沖液的選擇取決于凝膠染色的方法以及下游的應(yīng)用。如果染液中含有固定劑， 如甲醇和 乙酸。推薦使用含 0.1-0.5%SDS 或酸不穩(wěn)定的表面活性劑的洗脫緩沖液。如果凝膠不染色或負 染色，蛋白可以用雙蒸水或含有甲酸/水/異丙醇洗脫緩沖液（1:3:2 V/V/V
