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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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參考價(jià) | ¥ 1100 |
訂貨量 | 1 |
- 型號(hào)
- 品牌
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- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2019-07-25 11:26:55瀏覽次數(shù):1971
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Annexin V-FITC染色液用于鑒定凋亡和壞死細(xì)胞。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸PS有高度親和力,可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合,將Annexin V標(biāo)記熒光染料FITC利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
Annexin V搭配化丙啶(Propidium Iodide, PI)或7-AAD等DNA染色液使用,可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。
搭配PI檢測(cè)喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示:
QWZO[3QLDUS)FS@VMQCDMA1.png
Annexin V-FITC實(shí)驗(yàn)操作指南步驟:
1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300g離心5min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
注:本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證,良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用于凋亡檢測(cè)時(shí),可能會(huì)因?yàn)橐让赶?、吹打等處理?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響,請(qǐng)謹(jǐn)慎處理。
2. 取1-5×10^5重懸的細(xì)胞,300g離心5min,棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。
3. 細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-FITC染色液和5μL的細(xì)胞核DNA染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育15-20min。
5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。
保存條件:
4℃可保存1年;Annexin V-FITC染色液需要避光保存。
注意事項(xiàng):
1. 為獲得的使用效果,請(qǐng)?jiān)?-6個(gè)月內(nèi)使用,Annexin V-FITC禁止冷凍保存;
2. 染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加;
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,操作和存放過程盡量注意避光保存;
4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
(本試劑產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用,不可用于臨床診斷或治療)