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DNS試劑(Ghose法)檢測原理
2024-4-26 閱讀(359)
DNS試劑(Ghose法)檢測原理
產(chǎn)品簡介：
Ghose法DNS試劑。又稱3,5-二硝基水楊酸法或簡稱DNS法,DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一,定量檢測植物組織樣品中的總糖和還原糖的含量。
檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在540nm處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系。
【產(chǎn)品名稱】：DNS試劑(Ghose法)
【產(chǎn)品規(guī)格】：500ml
【儲(chǔ)存條件】：2-8℃
【有效期】：12個(gè)月
操作步驟(僅供參考)：
1、 還原糖的提?。?/span>
①稱取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器②50℃水浴30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖徹底浸出
③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50ml離心管，4000g離心5min。
④留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸餾水，混勻，再次4000g離心5min。
⑤留取上清液，將2次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。
2、 總糖的水解和提?。?/span>
①稱取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②向容器中加入10ml 6M鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸30min，并不時(shí)攪拌。
③取2滴滴加于載玻片上，滴加1滴顯色液，檢查水解是否完全，如已經(jīng)水解完全則不顯示藍(lán)色。
④水解完畢后，冷卻至室溫，加入6M氫氧化鈉溶液，使溶液pH至7.4左右，用蒸餾水定容至100ml，混勻，4000g離心5min或過濾，獲得上清或?yàn)V液。
⑤取上清或?yàn)V液10ml，用蒸餾水定容至100ml，成稀釋10倍的總糖水解液(提取液)，取1ml總糖水解液，測定其還原糖的含量。
注意事項(xiàng)：
1、 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。
2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時(shí)，應(yīng)小心操作，避免傷人。
3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為11.6M，應(yīng)稀釋至6M后使用。
4、 待測樣本如不能及時(shí)測定，應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。
5、 如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。6、 總糖計(jì)算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。
