珠子抗體-Anti-GFP標(biāo)簽馬伯瓊脂糖共軛(避重輕鏈特制款)數(shù)據(jù)表產(chǎn)品描述收起

綠色熒光蛋白廣泛應(yīng)用于蛋白定位和蛋白動力學(xué)分析。GFP-beads是GFP-tag抗體與瓊脂糖凝膠微球(瓊脂糖)偶聯(lián),專門用于純化和檢測細胞裂解液或菌體裂解液中的GFP標(biāo)簽蛋白。適用于IP實驗。當(dāng)細胞或菌體裂解液與本試劑混合,樣本中的GFP標(biāo)簽重組蛋白與GFP珠子特異性結(jié)合,其他雜蛋白不結(jié)合。本試劑結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,結(jié)合GFP標(biāo)簽蛋白效率高。IP產(chǎn)物可以應(yīng)用于質(zhì)譜分析,酶活性測定等生化分析手段中。本產(chǎn)品是特別制備的GFP珠子產(chǎn)品,使用該產(chǎn)品進行IP實驗,在后續(xù)的IP-WB步驟中,可以*避免抗體輕重鏈的條帶出現(xiàn)。

產(chǎn)品儲存收起

儲存于4°C,禁止凍存。保質(zhì)期12個月。

使用指南收起

1. 收集細胞：

對于一個免疫共沉淀反應(yīng),推薦使用106 - 107個表達GFP融合蛋白的哺乳動物細胞。服出培養(yǎng)液,加lml預(yù)冷PBS于細胞中并刮下細胞,之后將細胞轉(zhuǎn)入預(yù)冷管中。4℃,500克離心3分鐘,棄上清液。用預(yù)冷PBS洗兩遍細胞沉淀物,輕輕重懸細胞。

2. 裂解細胞：

(1)用200μl預(yù)冷的裂解緩沖重懸細胞。

注:在裂解緩沖中加入蛋白酶抑制劑(推薦使用雞尾酒類型的蛋白酶抑制劑,貨號A10004:200X蛋白酶抑制劑復(fù)合物)

(2) 將離心管放在冰上30分鐘，每10分鐘重懸一次細胞。

(3) 16000克,4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到一個新的預(yù)冷離心管中,加300μ1稀釋緩沖,丟掉沉淀。

注:在這步細胞溶解物可放入-80℃長期保存。同樣需要在在稀釋緩沖中加入蛋白酶抑制劑。

3.平衡珠子:渦旋anti-GFP瓊脂糖,吸取25μ1 anti-GFP瓊脂糖至預(yù)冷500μ1稀釋緩沖中,1200克,4℃離心2分鐘,去掉上清,重復(fù)兩次。

4. 結(jié)合蛋自：

(1)將第3步獲得的細胞蛋白提取液加入平衡后的anti-GFP瓊脂糖中(如有需要,可取50μ1上清液作為輸入對照用于兔疫印跡分析),在4℃環(huán)境中上下顛倒孵育1小時。

(2) 1200克,4℃離心2分鐘,去掉上清。

5. 洗anti-GFP瓊脂糖:重懸于GFP珠子500μl預(yù)冷的溶解液中,1200克,4℃離心2分鐘,去掉上清,重復(fù)2 - 3次。

可選做:在第二次清洗中將鹽濃度提高到500毫米。

6. 洗脫結(jié)合蛋白：

(1) 100μl SDS加載緩沖重懸anti-GFP瓊脂糖。

(2)將anti-GFP瓊脂糖在95℃中加熱10分鐘,使免疫復(fù)合物分離出來。1200克,4℃離心2分鐘,取上清跑sds - page。

(3)如果后續(xù)IP產(chǎn)物需要進行質(zhì)譜鑒定,可以使用以下方法來替代步驟(1)和(2):加50μl 0.2 m,鹽酸重懸anti-GFP瓊脂糖,保持混勻狀態(tài)孵育30年代,1200 g, 4℃離心2分鐘。將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中,加入5μl lM PH10.4的三羥甲基氨基甲烷基液中,和可重復(fù)此步驟來增加洗脫效率。

其他推薦產(chǎn)品收起

#M20001 His-Tag (2A8) Mouse mAb

#M20002 Myc-Tag (19C2)鼠標(biāo)單抗

#M20003 HA-Tag (26D11)小鼠單抗

#M20004 GFP-Tag (7G9)小鼠單抗

#M20007 GST-Tag (12G8)小鼠單抗

#M20008 DYDDDDDK-Tag (3B9)小鼠單抗(與Sigma’s Anti-FLAG M2抗體結(jié)合)

M20012抗myc - tag小鼠單抗(瓊脂糖結(jié)合)

M20013抗ha - tag小鼠單抗(瓊脂糖結(jié)合)

#M20018 Anti-DYKDDDDK-Tag小鼠抗體(瓊脂糖偶聯(lián))(與Sigma’s Anti-FLAG M2相同)

#M20118抗dykddddk - tag小鼠抗體(磁珠)(與Sigma’s Anti-FLAG M2相同)