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FITC-xtra 異硫氰酸熒光素是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光素，雖然FITC是用于制備綠色熒光生物共軛物的zuiliuxing的熒光標(biāo)記染料，但是FITC存在某些限制，例如用于顯微鏡成像的嚴(yán)重光漂白和pH敏感熒光。與相應(yīng)的FITC綴合物相比，用FITC-xtra制備的蛋白質(zhì)綴合物是非常優(yōu)秀的。FITC-xtra綴合物比FITC綴合物明顯更亮，并且更加光穩(wěn)定。另外，F(xiàn)ITC-xtra的熒光不受pH（4-10）的影響。這種pH不敏感性是對(duì)FITC的重大改進(jìn)，F(xiàn)ITC僅在pH大于9時(shí)才發(fā)出其zuida熒光，F(xiàn)ITC-xtra具有幾乎相同F(xiàn)ITC的光譜特性。此外，F(xiàn)ITC-xtra在溫和綴合條件下比FITC產(chǎn)生高得多的綴合產(chǎn)率。像5-FITC，F(xiàn)ITC-xtra抗體綴合物適合于488nm激光線的激發(fā)，使其成為相應(yīng)的FITC標(biāo)記的抗體綴合物的替代物。在檢測(cè)條件相同的情況下，F(xiàn)ITC-xtra抗體綴合物提供比相應(yīng)的FITC標(biāo)記的綴合物高得多的信號(hào)/背景比。
1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)儲(chǔ)備溶液（溶液A）：
將100μL反應(yīng)緩沖液（例如，1M碳酸鈉溶液或1M磷酸鹽緩沖液，pH~9.0）與900μL目標(biāo)蛋白溶液（例如抗體，蛋白質(zhì)濃度> 2 mg / ml，如果可能）混合，得到1 mL蛋白標(biāo)記儲(chǔ)備液。
注1：蛋白質(zhì)溶液（溶液A）的pH值應(yīng)為8.5±0.5。如果蛋白質(zhì)溶液的pH低于8.0，則使用1Mtansuanqingna溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調(diào)節(jié)至8.0-9.0的范圍。
注2： 應(yīng)將蛋白質(zhì)溶于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中。如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或ganansuan緩沖液中，則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（例如硫酸銨和乙酸銨）。
注3：若使用不純的抗體、牛血清蛋白（BSA）和明膠穩(wěn)定的抗體，則標(biāo)記效果不會(huì)特別好。diedanhuana或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)。可以通過透析或旋轉(zhuǎn)柱除去diedanhuana或硫柳汞，以獲得zuijia標(biāo)記結(jié)果。
注4：如果蛋白質(zhì)濃度小于2mg / mL，則綴合效率明顯降低。為獲得zuijia標(biāo)記效率，建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為2-10 mg / mL。
注3：若使用不純的抗體、牛血清蛋白（BSA）和明膠穩(wěn)定的抗體，則標(biāo)記效果不會(huì)特別好。diedanhuana或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)。可以通過透析或旋轉(zhuǎn)柱除去diedanhuana或硫柳汞，以獲得zuijia標(biāo)記結(jié)果。
注4：如果蛋白質(zhì)濃度小于2mg / mL，則綴合效率明顯降低。為獲得zuijia標(biāo)記效率，建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為2-10 mg / mL。
