Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶是 Q5® 超保真 DNA 聚合酶的改造版本，是一種新型熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶，具有 3'至 5'核酸外切酶活性，并融合增強(qiáng)延伸性能的 Sso7d 結(jié)構(gòu)域。Q5U 在niaomiding結(jié)合域中含有突變，能夠讀取和擴(kuò)增含有niaomiding和次huangpiaoling的模板。

許多有校對(duì)功能的聚合酶來(lái)自古細(xì)菌家族 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的niaomiding堿基時(shí)停止復(fù)制(Wardle, J. et al. (2008) Nucleic Acids Res. 36 (3), 705-711)。Q5U 在niaomiding結(jié)合域含有突變，能夠讀取和擴(kuò)增含有niaomiding和次huangpiaoling的模板。該特征可用于擴(kuò)增重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化、脫氨基、或受損 DNA，用于防止 PCR 體系中攜帶污染（與 dUTP 和 UDG 一起使用），以及用于 USER 克隆方法。

Q5U 是一種熱啟動(dòng)聚合酶，含有在室溫下抑制聚合酶活性的dute適配體，可在經(jīng)典 PCR 條件下達(dá)到zuiji擴(kuò)增。

Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶的常見應(yīng)用 古細(xì)菌家族 B 型聚合酶可以摻入/耐受多種修飾的核苷酸，但在遇到niaomiding和次huangpiaoling時(shí)會(huì)停止擴(kuò)增。Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶是一種經(jīng)過(guò)改造的 Q5 超保真 DNA 聚合酶，可有效地整合 dUTP 并擴(kuò)增含niaomiding的模板。由 Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶的常見應(yīng)用如上圖所示。 圖 2：Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶實(shí)現(xiàn)重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化 DNA 的優(yōu)異擴(kuò)增 使用 Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 熱啟動(dòng) DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 試劑盒（K）擴(kuò)增重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的人基因組 DNA 靶標(biāo)。擴(kuò)增子名稱和片段長(zhǎng)度標(biāo)注在電泳膠上方。每 25 μl 反應(yīng)物含有 12 ng 重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的 DNA（Qiagen）。所有反應(yīng)均根據(jù)制造商的推薦使用 35 個(gè)循環(huán)進(jìn)行，通過(guò)微流體芯片 LabChip 分析展現(xiàn)。 圖 3：Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶能夠高效擴(kuò)增石蠟包埋正常肺樣品 DNA
石蠟包埋正常肺樣品 DNA（Biochain）。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度標(biāo)注在電泳膠上方，每個(gè) 25 μl 反應(yīng)物含有 18 ng FFPE DNA（Biochain），循環(huán)條件與該樣品類型的推薦一致，通過(guò)微流體芯片 LabChip 分析展現(xiàn)。 圖 4：Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶能夠高效擴(kuò)增酶促脫氨的 DNA 使用 Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 熱啟動(dòng) DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 試劑盒（K）擴(kuò)增酶促脫氨（APOBEC）的基因組 DNA 靶標(biāo)。擴(kuò)增子名稱和片段長(zhǎng)度標(biāo)注在電泳膠上方。 每個(gè) 50μl 反應(yīng)物含有 12 ng 酶促脫氨基的 DNA。 所有反應(yīng)均根據(jù)制造商的推薦使用 35 個(gè)循環(huán)進(jìn)行，并通過(guò)微流體芯片 LabChip 分析展現(xiàn)。 圖 5: USER® 克隆流程 在 USER 克隆中，通過(guò) PCR 擴(kuò)增出 DNA 靶分子和克隆載體，兩個(gè)片段的同源序列設(shè)計(jì)為 8-12 個(gè)堿基。PCR 引物以 5'A 起始，并在同源區(qū) 3'端含有一個(gè)脫氧niaomiding（dU），可以設(shè)計(jì)為多片段組裝，核苷酸替換，插入和/或缺失。。建議每種引物終濃度為 0.5 μM 即可得到zuijia結(jié)果。 圖 6：Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶與 Taq 熱啟動(dòng) DNA 聚合酶相比，可更高效準(zhǔn)確的用于USER克隆使用 Q5U 熱啟動(dòng)超保真 DNA 聚合酶和熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶做 USER 克隆，將 3 kb lacZ 基因連接到 pET21a 載體骨架中。菌落總數(shù)（A）和藍(lán)色菌落的百分比（B）證明：有 Q5U 的反應(yīng)展現(xiàn)了更高的組裝效率和更高的準(zhǔn)確度。使用 Sanger 測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證組裝準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示：普通 Taq 酶組裝的 4 個(gè)藍(lán)色克隆中有許多點(diǎn)突變，但使用 Q5U 的 4 個(gè)藍(lán)色克隆中沒(méi)有突變（C）。“X"表示用普通 Taq 酶產(chǎn)生的克隆中發(fā)現(xiàn)的點(diǎn)突變數(shù)量，與以前的研究結(jié)果同樣證明了 lacZ 的高突變耐受性。(Barnes, W. M. (1992) Gene, 112, 29-35.) 隨酶提供的試劑如下試劑隨該產(chǎn)品提供