BJ5183-AD-1電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pCAMBIA2301M質(zhì)粒DNA檢測，轉(zhuǎn)化效率達(dá)10cfu/μg DNA以上。

基因型為:endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR(StrR)[pAdEasy-1 (AmpR )]

產(chǎn)品特點(diǎn):

BJ5183-AD-1電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株攜帶的pAdEasy-1質(zhì)粒包含了大部分人腺病毒5型的基因組序列(E1/E3基因缺失)，表達(dá)可供pAdEasy-1骨架質(zhì)粒和pAdEasy穿梭質(zhì)粒進(jìn)行同源重組的所有組分，產(chǎn)生重組腺病毒質(zhì)粒。pAdEasy-1為33.5kb，具有氨芐qingmeisu抗性，一旦與穿梭載體重組，其抗性消失。

操作方法:1.電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯(Gene Pulser®/MicroPulser ™electroporation cuvettes)插入碎冰中,壓實(shí)冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。(電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和DNA,用蒸餾水洗3 遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝干液體,放在超凈臺中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,待細(xì)胞剛化凍后,加入質(zhì)粒DNA(洗脫或溶解質(zhì)粒的溶液

中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋),用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺中用無菌吸頭將細(xì)胞/DNA混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,確保細(xì)胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。

3.啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置電擊參數(shù):2.4 kV,200Ω,25 μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾擦掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分,將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊。完成后,將電轉(zhuǎn)杯插入冰中,加入950μlt+A)無抗生素的 SOC 或LB培養(yǎng)基,并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中,37C,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時4.取 100-200μl左右的菌液或稀釋后的菌液,涂布于含相應(yīng)抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 12-18小時。