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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
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使用超液相色譜/三重串聯(lián)四桿質(zhì)譜開發(fā)高通量生物分析方法
2022-12-6 閱讀(112)
摘要：生物分析域的快速 LC/MS/MS液相色譜 方法開發(fā)受多個因素影響，是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)。為了在加快分析速度的同時保持高靈敏度，目標(biāo)分析物不應(yīng)該在受離子抑制影響的色譜保留范圍內(nèi)洗脫。質(zhì)譜儀的掃描速度必須足夠快，以獲得足夠多的數(shù)據(jù)點(diǎn)來明確表征由亞2µm 色譜柱分離得到的窄色譜峰。在典型的快速液相色譜條件下，產(chǎn)生的反壓會接近甚至高于目液相色譜系統(tǒng)（壓力限 ≤ 400bar（5800psig））的反壓限值。在本應(yīng)用摘要中，我們采用 Agilent 1290 Infinity LC 系統(tǒng)與 Agilent 6460 三重串聯(lián)四桿質(zhì)譜儀聯(lián)用，采用熱梯度聚焦 ESI（安捷倫噴射流技術(shù)，AJS）和添加了阿pu唑侖的人血漿基質(zhì)（2nM 至 5000nM，相當(dāng)于 0.06ng/mL 至 1544ng/mL）簡化高通量生物分析方法的開發(fā)。100µL 的加標(biāo)血漿樣品采用三倍體積乙腈沉淀并離心。200µL 上清液用三倍體積 0.1% 甲酸（FA）水溶液稀釋。每個樣本重復(fù)進(jìn)樣三次。采用通用離子源數(shù)據(jù)對 AJS 技術(shù)和傳統(tǒng)直角 ESI 技術(shù)進(jìn)行了比較。Agilent 1290 Infinity LC 三重串聯(lián)四桿 MS/MS 系統(tǒng)，高流速可達(dá) 2mL/min，高壓力可達(dá) 1200bar，駐留時間低至 1-2ms，相應(yīng)地，分析時間不超過 0.5min，并且不會犧牲定量數(shù)據(jù)的質(zhì)量。安捷倫的超高壓快速高分離度色譜柱（RRHD）的柱效更高，可得到更窄的色譜峰，被分析物的色譜峰峰高顯著增加，與基質(zhì)組分分離，可提高被分析物的響應(yīng)（靈敏度）。
儀器條件Agilent 1290 Infinity LC MS/MS 系統(tǒng)：Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，包括帶集成脫氣機(jī)的二元泵，帶溫控系統(tǒng)的自動進(jìn)樣器和柱溫箱。Agilent 6460A 三重串聯(lián)四桿 LC/MS 帶 AJS 技術(shù)離子源或傳統(tǒng)的直角 ESI 源。
