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上海斯邁歐分析儀器有限公司
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快速相色譜/串聯(lián)質譜分析血清中的da麻素和苯bing胺類藥物
2023-4-7 閱讀(125)
引言在美國和歐洲 ，da麻是最常見的濫用藥物 。而且像ben丙胺化合物的類交感神經藥物的濫用程度在過去幾年大幅增加 。由此導致越來越嚴重的交通安全問題 。針對這個問題 ，在 1998 年德國道路交通法將對服用da麻素 ，以及它們的亞甲基二氧基衍生物 ，MDMA 及 MDE 之后駕駛的行為進行處罰 。自此之后 ，血液中四氫da麻酚(THC)或ben丙胺的檢測量快速增加 。因此 ，各實驗室迫切需要能夠快速分析大量樣品的方法及手段 。液相色譜/質譜/質譜是最合適的技術 。ben丙胺是一種堿性化合物 ，特別是電噴霧離子化的模式 ，而極性較弱的da麻素則在大氣壓化學電離源模式下具有較好的靈敏度（見圖 1）。為了實現(xiàn)在一次進樣就可分析兩種化合物 ，使用安捷倫組合離子源(G1978B)以實現(xiàn)所有的分析目的 。組合源可以單獨進行電噴霧 ，大氣壓化學源或者兩種模式同時進行 。模式和參數(shù)也可以時間編程 。
試劑所有的溶劑和試劑都是分析純 。甲醇 ，丙酮 ，醋酸 ，二氯甲烷 ，異丙醇和氨水來自默克公司 。固相萃取柱采用 Baker 公司 ，所有的藥物標準品和氘代標準品來自 Cerilliant (Austin, TX)。
樣品制備1 毫升的血清 ，用 6 毫升磷酸緩沖液(0.1 M, pH 6)稀釋 。加入 50 微升內標混合液（濃度為 ，每微升含1ng 的 D5-MDA,D5-MDMA, D6-MDE 和 D9-THC-COOH 與 D3-THC 和D3-THC-OH) 每種 0.1 ng/µL 。溶液混合 3 分鐘 ，然后在 3000 轉下離心 10 分鐘 。固相萃取系統(tǒng)可以采用自動化 ，如 Caliper Rapid- Trace SPE 工作臺 ，或者手動系統(tǒng) 。上清液加入預先活化的萃取柱(Bakerbond SPE C18,500 mg),活化步驟是先用 3 毫升甲醇沖洗兩次 ，然后用 2 毫升水沖洗一次備用 。樣品溶液經過之后 ，用水淋洗兩次 ，再用 80:20; v/v 的水/甲醇淋洗兩次 ，最后用 0.1M 甲酸溶液淋洗一次 。萃取柱干燥10 分鐘 。洗脫分兩步 。首先用 3 毫升的 50:50; v/v 的二氯甲烷/丙酮將da麻素洗脫出來 ，然后用 40:10:2; v/v/v的二氯甲烷/異丙醇/氨水將苯bing胺 ，阿片 ，以及代謝物洗脫出來 。將兩個洗脫液合在一起 ，在 30 °C 下氮氣吹干 ，用 100 微升甲醇再溶 。最后用水稀釋(1:4),以改善色譜峰形 。
液相色譜/質譜/質譜液質聯(lián)用系統(tǒng)包括 1200 高分離度快速液相色譜(RRLC)和 6410 串聯(lián)四極桿質譜儀 。不同的流動相 ，流速 ，色譜柱參數(shù)來篩選適合的 ZORBAX 的色譜柱以獲得最佳的分離度和最快的分析速度 。
方法認證液相/質譜/質譜方法驗證用血清中 THC, THC-OH,THC-COOH, MDA, MDMA 和MDE 的定性和定量來完成 。驗證程序根據(jù) Peter[1]和德國毒物及法醫(yī)化學協(xié)會的相關規(guī)定和方法進行 。在方法驗證中使用基于微軟 Excel 的驗證程序(VALSTAT[2])。不含藥物的血清作為空白基質用于方法驗證 。采用 7 點校正曲線 。每個水平都是空白血清加 50 微升含藥物的甲醇溶液 。校正曲線見表 4。
7 點校正曲線 ，其中每個數(shù)據(jù)點重復六次 。校正曲線采用線性模式 ，對于大多數(shù)的化合物其相關系數(shù)大于 0.99。以第三個校正點的信噪比計算出定量限（峰-峰比 ）。所有的定量離子和定性離子都被準確地測量 ，即使為了提高峰形而采用1:4 的水稀釋樣品 ，其具有很好的信噪比（見圖 4）。日內測定和日間分析結果精密度是在以下條件進行的 ：兩個濃度水平（低 ，高濃度 ）在八天數(shù)據(jù)的結果計算而得 。日內測定的精密度是從一天之內兩個濃度水平的樣品八次結果的變異系數(shù)計算得出 。日間測定精密度是從八天測得結果的平均值 。日內測定精密度在 2.9-15.3% 之間（表 5）。日間測定精密度在 3.4-15.3% 之間 。
結論使用 1.8 µm 粒徑色譜柱的液相分離（12 分鐘 ），獲得了比氣質聯(lián)用分析更快的分析速度（45 分鐘 ）。由于兩類化合物的極性不同 ，因此采用了組合離子源以使每個化合物都獲得最佳的相應（利用時間編程進行采集模式切換 ）。與現(xiàn)有的氣質聯(lián)用分析方法相比 ， 高分離度快速液相色譜/串聯(lián)質譜系統(tǒng)可以獲得更高的靈敏度和選擇性（對于氣質分析 ，進樣體積一般是 1 微升 ，而液質分析的條件是 ：樣品在進樣前稀釋 4 倍 ，進樣體積是 10 微升 ）。日間和日內測定精密度也很好 ，變異系數(shù)在 3-15%之間 ，而且大多數(shù)的化合物的精密度在 5-10%之間 。其它的濫用藥物也將被包括在此液相色譜/質譜/質譜方法里 。其中在線固相萃取也將被評價 。
