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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計(jì) |
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液質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定多種水果中的 21 種 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑
2022-3-2 閱讀(383)
摘要：本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)基于我們之前的研究[1] ，介紹了一種利用 QuEChERS 結(jié)合 HPLC-ESI-MS/MS 技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水果中 21 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的方法。首先 用含 1% 乙酸的乙腈對(duì)樣品進(jìn)行萃取，然后在硫suan鎂的存在下使用 C18 吸附 劑進(jìn)行凈化。使用 Agilent Infinity UHPLC 1290 系統(tǒng)在 C18 色譜柱上分離所 得的溶液，并使用安捷倫 ESI-三重四極桿質(zhì)譜儀在多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 模式 下進(jìn)行檢測(cè)。采用基質(zhì)匹配外標(biāo)校準(zhǔn)方法進(jìn)行定量分析。對(duì)于檢測(cè)的蘋(píng)果、 梨、草莓、葡萄和橙子基質(zhì)，所有 21 種化合物均表現(xiàn)出 0.10–1000 µg/L 范圍內(nèi) 2–3 個(gè)數(shù)量級(jí)的動(dòng)態(tài)線性范圍，相關(guān)系數(shù)高于 0.99。該方法的檢出 限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分別在 0.020 µg/kg–6.0 µg/kg 和 0.10 µg/kg– 15.0 µg/kg 之間。對(duì)于所有化合物，平均加標(biāo)回收率在 73.0%–111.0% 的 范圍內(nèi)，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs，n = 6）在 3.0%–17.2% 的范圍內(nèi)。該方 法快速、簡(jiǎn)單、有效、靈敏且準(zhǔn)確，符合對(duì)水果中這些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè) 定要求。
前言：植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 (PGRs) 通常是合成的化合物，其結(jié)構(gòu) 和生理功能與天然和內(nèi)源性植物激素相似。它們可能在 增強(qiáng)植物抗逆性、促進(jìn)植物細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)以及提高植 物產(chǎn)量和質(zhì)量方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此，它們已廣泛應(yīng) 用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。但是，在缺乏監(jiān)督的情況下過(guò)度使用 這些 PGRs，可能導(dǎo)致蔬菜和水果中 PGRs 殘留量升高， 從而可能威脅公共健康。目前，許多國(guó)家和國(guó)際組織已 制定相關(guān)法規(guī)，規(guī)定了各種水果中某些 PGRs 的最大允 許殘留* (MRLs)。歐盟已規(guī)定大多數(shù)新鮮水果中、噻苯隆和抑芽唑的 MRLs 分別為 0.02、0.01 和 0.01 mg/kg[2] 。日本將西瓜中抗倒酯的 MRL 限制為 0.02 mg/kg[3] ；中國(guó)將葡萄中氯吡脲的 MRL 限制為 0.05 mg/kg，將某些水果（如蘋(píng)果和梨）中 2,4-D 的 MRL 限制為 0.01 mg/kg[4] 。因此，開(kāi)發(fā)一種高靈敏方 法來(lái)監(jiān)測(cè)相關(guān)農(nóng)產(chǎn)品中的這些 PGRs 殘留至關(guān)重要。 研究人員提出采用 LC/MS 代替 ELISA、GC 和 LC 等傳 統(tǒng)方法來(lái)測(cè)定 PGRs 殘留[5-7] 。由于 PGRs 種類(lèi)很多， 化學(xué)結(jié)構(gòu)差異巨大。這使得同時(shí)分析多類(lèi) PGRs 面臨非 常大的挑戰(zhàn)。目前報(bào)道的大多數(shù) LC/MS 方法僅關(guān)注幾 類(lèi) PGRs。本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹一種通用方法，該方法可將 QuEChERS 提取凈化方法與 HPLC-MS/MS 技術(shù)結(jié)合起 來(lái)，用來(lái)同時(shí)測(cè)定多種水果中的常用 PGRs。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑與材料 21 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 (PGRs) 包括矮壯素、助 壯素、2,4,5-三碘苯甲酸、赤霉酸、環(huán)丙酰 草胺、脫落酸 (ABA)、氯吡脲、6-芐氨基嘌呤、噻苯隆、 2,4-D、調(diào)果酸、4-氯苯氧乙酸 (4-CPA)、1-萘乙酸、吲 哚-3-乙酸 (IAA)、抗倒胺、多效唑、烯效唑、抑芽唑和 抗倒酯，它們?nèi)抠?gòu)自 Dr. Ehrensterfer（德國(guó)），純度 高于 96%。用甲醇（HPLC 級(jí)）配制濃度為 100.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液， 并將其保存在 4 °C 下。使用初始流動(dòng)相或基質(zhì)提取物將 儲(chǔ)備液進(jìn)一步稀釋至一系列濃度，用于外標(biāo)定量。
樣品前處理 準(zhǔn)確稱(chēng)取 10 g 樣品，加入 50 mL 離心管中。然后加入 10 mL 酸化乙腈（1% 乙酸的乙腈溶液）。將混合物均質(zhì) 化 2 分鐘。將 4 g MgSO4 和 1.5 g 乙酸鈉加入樣品瓶中。 然后將其渦旋混合 1 分鐘，再以 4000 rpm 離心 3 分鐘。 將 2 mL 上清液樣品溶液裝入潔凈的 2 mL 樣品瓶中，該 樣品瓶中含 25 mg C18 吸附劑和 150 mg 無(wú)水 MgSO4。 將樣品瓶渦旋混合 1 分鐘，然后以 16000 rpm 離心 5 分 鐘。使上清液通過(guò) 0.22 µm 膜的過(guò)濾，儲(chǔ)存在 4 °C 下， 待 LC-MS/MS 分析。
儀器條件 液相色譜配置和條件 • Agilent Infinity UHPLC 1290 二元泵 (G4220A) • 安捷倫高性能自動(dòng)進(jìn)樣器 (G4226A) • 安捷倫自動(dòng)進(jìn)樣器溫控 (G1330B) • 安捷倫柱溫箱 SL (G1316B) 色譜柱 Agilent XDB-C18, 4.6 × 100 mm, 5.0 µm 柱溫 35 °C 進(jìn)樣量 5 µL 進(jìn)樣針清洗 沖洗口（100% 甲醇），5 秒 流動(dòng)相 A) 5 mmol/L 乙酸銨/0.05% 甲酸水溶液 B) 乙腈 梯度流速 0.5 mL/min 梯度洗脫曲線如表 1 所示
質(zhì)譜配置和條件 • 配備安捷倫噴射流離子源的 Agilent 6460 三重四極桿質(zhì)譜儀 電離模式 正/負(fù)離子模式 掃描模式 多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 毛細(xì)管電壓 4000 V 噴嘴電壓 500 V 霧化氣壓力 45 psi 干燥氣溫度 300 °C 干燥氣流速 10 L/min 鞘氣溫度 375 °C 鞘氣流速 11 L/min
結(jié)果與討論 質(zhì)譜檢測(cè)的優(yōu)化 最初，將各種化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入質(zhì)譜儀中來(lái)優(yōu)化質(zhì) 譜采集條件。選擇穩(wěn)定的母離子，例如正離子模式下的 [M+H] + 或負(fù)離子模式下的 [M-H] – 實(shí)施進(jìn)一步碎裂。某 些化合物（如 6-BA、噻苯隆、氯吡脲和抗倒胺）可同 時(shí)生成 [M+H] + 和 [M-H] –?？紤]到化合物的性質(zhì)和靈敏 度以及進(jìn)行時(shí)間段掃描的必要性，采用負(fù)離子模式檢測(cè) 6-BA、噻苯隆和氯吡脲，采用正離子模式檢測(cè)抗倒胺。 選擇母離子后，然后優(yōu)化碎裂電壓以使母離子獲得最高 的靈敏度。然后通過(guò)子離子掃描和 MRM 掃描獲得每個(gè) 母離子的特異碎片離子和碰撞能量，從而使得每個(gè)化合 物的響應(yīng)盡可能高，干擾盡可能低。
