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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> 小鼠主動脈平滑肌細胞
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產(chǎn)品型號
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2020-10-20 11:53:27瀏覽次數(shù):156次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠主動脈平滑肌細胞 | 5×105 | XG-X6474 |
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
ALBUMIN, HORSE銅鉛鋅鎘鎳與鉻混合標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)樣)anti- CALML4 antibody人Podocin ELISA試劑盒
Vaseline水中高錳酸鹽指數(shù)(COD錳法)(標(biāo)樣)anti- CALML5 antibody人腎病蛋白(nephrin)ELISA試劑盒
Resveratrol總標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)樣)anti- CALML6 antibody人α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒
Chelidonic acid鉛標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)樣)anti- Calmodulin antibody人尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒
ThyMol酸鹽(標(biāo)樣)anti- CALN1 antibody人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)ELISA試劑盒
Thymol Blue總標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)樣)anti- Calnexin antibody人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)ELISA試劑盒
ThyMolphthalein ;DithyMolphthalide; 5′,5″-Diisopropyl-2′,2″-diMethylphenolphth- alein; 3,3-Bis(4-hydroxy-2-Meth-yl-5-isopropylphenyl)phthalide;氨氮(以氮計)(標(biāo)樣)anti- Calpain 1 antibody人TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒
NA氟,氯,硫酸根與硝酸根混合標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)樣)anti- Calpain 11 antibody人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)ELISA試劑盒
小鼠主動脈平滑肌細胞Human PLSCR2 (Phospholipid Scramblase 2) ELISA Kit T細胞特異性趨化因子抗體anti- RIMBP2 antibody轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PI3K2α (Phosphoinositide-3-Kinase Class-2-Alpha Polypeptide) ELISA Kit細胞凋亡抑制因子抗體anti- RIMKLB antibody整合素β3(ITGβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human GPC1 (Glypican 1) ELISA Kit CIDEB抗體anti- RIMS3 antibody腫瘤壞死因子配體超家族成員14(TNFSF14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human GPC2 (Glypican 2) ELISA Kit D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體anti- RIMS4-Specific antibody基質(zhì)金屬蛋白酶19(MMP19)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human GPC3 (Glypican 3) ELISA Kit 降鈣素基因相關(guān)肽1型受體抗體anti- RIN1 antibody骨形成蛋白8B(BMP8B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human GPC4 (Glypican 4) ELISA Kit 降鈣素抗體anti- RIN3 antibody胰島素樣蛋白5(INSL5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PS (Phosphatidylserine) ELISA KitCSMD1抗體anti- RING1 antibodyN-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGLU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human PLTP (Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit 金屬肽鏈內(nèi)切酶抗體anti- RINT1 antibody尿皮質(zhì)素2(UCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
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