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原位雜交(綠色熒光單標(biāo))

訂       金: 240

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號茁彩生物

品牌ZCIBIO茁彩生物

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

更新時(shí)間:2024-04-30 14:22:25瀏覽次數(shù):383次

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原位雜交(綠色熒光單標(biāo)): 主要試劑:DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI??篃晒獯銣绶馄瑒?。雜交液。

原位雜交(綠色熒光單標(biāo))

原位雜交(綠色熒光單標(biāo))價(jià)格:240元


一.原位雜交(綠色熒光單標(biāo))項(xiàng)目介紹

1. 原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

2. 所需器材:

脫水機(jī)G-JT12s,包埋機(jī)G-L5/p5,病理切片機(jī)RM2016,凍臺(tái)G-P1,烤箱GFL-70/230,組織攤片機(jī)G-KDP,載玻片及蓋玻片,正置熒光顯微鏡,成像系統(tǒng),恒溫箱,高壓滅菌鍋,移液槍,鐘擺搖床。

3. 主要試劑:DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI??篃晒獯銣绶馄瑒?。雜交液。


 二.石蠟切片熒光探針原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟


實(shí)驗(yàn)流程:

  石蠟切片熒光探針原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟

  1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。

  3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。

  4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化:根據(jù)組織固定時(shí)間長短,切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

  6、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。

  7、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針雜交液, 恒溫箱37度雜交過夜。

  8、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。

  9、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

  10.鏡檢拍照:切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm,發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm,發(fā)紅光。)DAPI染核,為藍(lán)光。



注意事項(xiàng):

1.mRNA為檢測對象時(shí),需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理。

2.FISH切片保存時(shí)間較短,應(yīng)盡快取圖。



原位雜交(綠色熒光單標(biāo))

原位雜交(綠色熒光單標(biāo)): 主要試劑:DEPC。原位雜交固定液。PBS

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