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免疫熒光(雙標(biāo))

訂       金: 85

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)茁彩生物

品牌ZCIBIO茁彩生物

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

更新時(shí)間:2024-04-30 14:21:25瀏覽次數(shù):1810次

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免疫熒光(雙標(biāo)):在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測(cè)兩種抗原時(shí),需進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧?。雙重免疫熒光標(biāo)記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法。

免疫熒光(雙標(biāo))

免疫熒光(雙標(biāo))價(jià)格:85元

免疫熒光(雙標(biāo))服務(wù)簡介:
在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測(cè)兩種抗原時(shí),需進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧?。雙重免疫熒光標(biāo)記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法。

冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟:

1、 冰凍切片固定冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min

2、 修復(fù):切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min

4、 加試劑1,2:按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)2:29混合(試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用),加到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37恒溫孵育2小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min在圈內(nèi)滴加3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。

6、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))

7、 加二抗:玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。

8、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核:PBSPH7.4洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。

9、封片:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm;FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm


石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟:


1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯15-20min-二甲苯15-20min-無水乙醇10min-無水乙醇10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗(冬天脫蠟時(shí)間稍微延長)

2、 修復(fù):切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min

3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

4、 加試劑1,2:按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)2:29混合,加到圈內(nèi)覆蓋組織切片平放于濕盒內(nèi),37恒溫箱孵育2小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min,在圈內(nèi)滴加3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30min

6、 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))

7、 加二抗:玻片置于PBSPH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。

8、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核:PBS(PH7.4洗滌3次,每次5min去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min

9、封片:玻片置于PBS(PH7.4中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm;FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm




免疫熒光(雙標(biāo))

免疫熒光(雙標(biāo)):在同一組織細(xì)胞標(biāo)本上需要同時(shí)檢測(cè)兩種抗原時(shí),需進(jìn)行雙

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