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病毒滅活試驗病毒懸液該如何制備?

閱讀:1192      發(fā)布時間:2022-12-22
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  病毒滅活是指用物理或化學手段殺死病毒,但是不損害它們體內有用抗原的方法。滅活病毒,會使病容毒蛋白的結構受到破壞,蛋白不再有生理活性,所以失去感染,致病和繁殖能力,但是常規(guī)的滅活不影響病毒蛋白的一級結構,意思就是病毒蛋白的序列沒有變化。系統(tǒng)對抗原的識別分成兩種,一種是構像表位,一種是線性表位。構象表位意思就是蛋白的三維結構,而線性表位就是蛋白的序列一級結構。T細胞只需要識別線性表位就成接受呈遞細胞給出的信號,引發(fā)反應。所以滅活的病毒具有抗原性,但失去感染力。滅活的病毒失去感染活性,但仍有融合活性,用于動物細胞工程中的細胞融合的誘導劑。
  
 

病毒滅活試驗

 
 

  病毒滅活試驗病毒懸液的制備:
  
  1、從液氮中取出凍存的試驗用宿主細胞,在37°C溫水中迅速融化,用毛細吸管移植于含有細胞維持液的細胞管內,吹吸數次,使混勻,立即離心(3000r/min,3min),去上清液。再加入適當的細胞維持液,吹吸數次,使混勻,同上離心后,轉種于加有10培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細胞生長情況,在細胞長滿單層時,用于消毒試驗。
  
  2、取出低溫凍存的試驗病毒毒種,37°C水浴融化,用細胞維持液作10倍稀釋,然后接種于已經長滿單層細胞的細胞瓶內,置37°C溫箱中,使與細胞吸附、生長。逐日觀察病變,待3/4細胞出現(xiàn)病變時,收獲病毒。
  
  3、將含病毒及宿主細胞的培養(yǎng)液,在冰浴條件下,用超聲波(或反復凍融)破碎宿主細胞,釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要為細胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。按每管1.0分裝于無菌離心管(1.5)中。
  
  4、取1支病毒懸液,按病毒滴度測定法,測定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80°C備用。

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