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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖原系列>> 糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒紫外分光光度法

糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒紫外分光光度法
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貨號(hào) BK-01S6983
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒紫外分光光度法

50管/48樣

紫外分光光度法

BK-01S6983

商品介紹:

測(cè)定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。糖原的分解主要在GPa的催化下進(jìn)行。

測(cè)定原理:

未添加激活劑時(shí),GPa催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153537.png

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

吖啶黃素(2.5mg/支)  1ml/支*5

2500U 末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移  

250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH9.5  Phosphate Buffer,0.5M, pH9.5  常溫保存

0.5mL X-Gal干粉 X -Gal Powder -20℃避光保存

2 ug pOTB7 PPP2R1A pOTB7 PPP2R1A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

明膠  20支

1瓶 WPMY-1細(xì)胞株 WPMY-1 低溫運(yùn)輸和保存

志賀氏菌增菌肉湯-新生 Shigella Broth 250g

100g L- 谷 L-Glutamic Acid 室溫密封保存

MC(不含瓊脂)  250g

0.1mg 山羊抗兔IgG,熒光素488標(biāo)記 Goat Anti-Rabbit IgG ,IF488 Conjugate  4℃保存

糖原磷酸化酶a(GPa)測(cè)試盒紫外分光光度法SRRM4  絲/相關(guān)核基質(zhì)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

PSCD1  細(xì)胞附著蛋白PSCD1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

Amisyn  突觸融合結(jié)合蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml

VCAM-1  管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml

SH2D1A/SAP  信號(hào)傳導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

hnRNP M/CEAR  異質(zhì)性核糖核蛋白M抗體 規(guī)格: 0.2ml

SLC39A11  溶質(zhì)載體家族39成員11抗體 規(guī)格: 0.2ml

GAJ/MND1  減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

VSV-G tag  VSV-G tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-rat IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Bad(Ser155)  磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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