目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 磷脂酶C(PLC)測試盒可見分光光度法
| 貨號 | BK-01S6658 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：磷脂酶C(PLC)測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6658
產(chǎn)品分類：脂肪酸代謝系列
商品介紹：
測定意義: 磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在于微生物及動植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。 測定原理 磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基，在410nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
250mL Citrate Buffer（檸檬酸鹽緩沖液）,0.5M,pH5.5 Citrate Buffer,0.5M,pH5.5 常溫保存
100次 超快非醇核酸沉淀劑 Magic Solution DNABACK 4℃保存
2 ug pGL4.26 pGL4.26 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（Levine） Levine EosinMethylene Blue Agar Medium 250g
1瓶 HCT-8/FU細(xì)胞株 HCT-8/FU 低溫運(yùn)輸和保存
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（含小倒管） Lactose Peptone Broth 10ml*20支/包
250U T7核酸內(nèi)切 I T7 Endonuclease Ⅰ -20℃保存
1mL RNA Loading Buffer,6X RNA Loading Buffer,6X 常溫保存
1 管 E2566大腸桿菌 ER2529 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRevTRE pRevTRE 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
創(chuàng)傷弧菌成套生化鑒定管 9種*2套/盒*5盒
磷脂酶C(PLC)測試盒可見分光光度法Rabbit anti-MG IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-VASP(Ser239) 磷酸化管擴(kuò)張刺激磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PAR4 (Thr163) 磷酸化蛋白活化受體4抗體 規(guī)格: 0.1ml
TGF beta 3 轉(zhuǎn)移生因子β3（TGFβ3）抗體 規(guī)格: 0.1ml
VILIP1 神經(jīng)視錐蛋白樣1抗體(神經(jīng)鈣蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Monkey IgG 兔抗猴IgG 規(guī)格: 1mg
FIGNL1 FIGNL1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Thr231) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
RAB40C RAS基因家族蛋白RAB40C抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-STAT5a(Ser726) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體 規(guī)格: 0.1ml
APOD 載脂蛋白D抗體 規(guī)格: 0.2mlNectin 4 毒受體相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
MSF/Cell division control protein septin D1 細(xì)胞周期調(diào)控蛋白D1抗體 規(guī)格: 0.2mlDNA Ligase IV/LIG4 DNA連接4抗體 0.2ml
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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