目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
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更新時(shí)間：2024-01-02 15:21:54瀏覽次數(shù)：1704評(píng)價(jià)
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| 貨號(hào) | BK-01S6322 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng)：輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6322
產(chǎn)品分類(lèi)：
商品介紹：
| 測(cè)定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。 測(cè)定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。 需自備的儀器和用品 可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 | ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
甲醛脫氫酶（FDH）測(cè)試盒 甲醛脫氫酶（FDH）測(cè)試盒微量法 微量法
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輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒 輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒微量法 微量法
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6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒 6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒微量法 微量法
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胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測(cè)試盒 胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測(cè)試盒微量法 微量法
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NADP蘋(píng)果酸酶（NADPME）測(cè)試盒 NADP蘋(píng)果酸酶（NADPME）測(cè)試盒微量法 微量法
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NAD蘋(píng)果酸酶（NADME）測(cè)試盒 NAD蘋(píng)果酸酶（NADME）測(cè)試盒微量法 微量法
NAD蘋(píng)果酸酶（NADME）測(cè)試盒 NAD蘋(píng)果酸酶（NADME）測(cè)試盒紫外分光光度法 紫外分光光度法
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測(cè)試盒 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測(cè)試盒微量法 微量法
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測(cè)試盒 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測(cè)試盒紫外分光光度法 紫外分光光度法
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒 肌酸激酶(CK)測(cè)試盒微量法 微量法
phospho-GEF H1 (Ser886) 磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體
phospho-Afadin (Ser1721) 磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
ARPC1A 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體
ANKRD32 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體
ATXN7L3B 共濟(jì)失調(diào)7樣蛋白3B抗體
POP1 感染性蛋白白1抗體
ASB5 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族5抗體
ABP1 植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體
phospho-ATF2 (Thr55) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
ADRA1B alpha 1腎上腺素能受體B抗體
Bcl-2 alpha Bcl2 alpha蛋白抗體
BAT5 白細(xì)胞抗原B相關(guān)轉(zhuǎn)錄蛋白5抗體
BTBD1 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1（丙型肝炎病毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8）抗體
BCL7B BCL7B蛋白抗體
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法BNC2 堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體
BCL7C B細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體
BSCL2 先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體（常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17）
BTG1 B細(xì)胞遷移基因1抗體
BEAN1 脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白BEAN1抗體
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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