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上海博翎儀器設(shè)備有限公司

血清脂蛋白的離心分離方法

時(shí)間:2022-4-4閱讀:129
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        利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液,在各種型號(hào)的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果。下面舉了幾個(gè)分離實(shí)例,實(shí)際上還可以應(yīng)用于各種型號(hào)各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭。

(一)梯度液

 
A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1
ml 1N NaOH,混勻至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。終密度1.006g/cm3,PH10.37。
B液:加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH9.72。
C液:加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH8.86。
(二)離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭
• 離心機(jī):Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。
Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī)。
• 轉(zhuǎn)頭,離心管;S 140 AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。
S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。
S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。
(三)血漿-血球分離:
全血,角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min,沉淀為血細(xì)胞,上清血漿待用。
(四)乳糜粒分離
離心參數(shù):各種轉(zhuǎn)頭均可用,4×106(g×min),10℃
梯度液:離心管下部3/4容積為血漿,上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。
離心結(jié)果:乳糜粒上浮,離心管傾斜,吸管貼管壁慢吸出(約占血漿容積的2~6%。禁令12小時(shí)以上供血者血漿中乳糜含量很低,食后供血者含量較高。
(五)血清脂蛋白分離
VLDL分離(ρ<1.006g/cm3
轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
下部600μl血漿
上部300μl A液
140,000rpm×50min
16℃
加速:5
減速:7
可見明顯分層上部約1/3VLDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL機(jī)組)
下部3.4ml血漿
上部1.7mlA液
80,000rpm×4.5hrs
16℃
加速:5
減速:7
同上
P70AT
(CP-MX機(jī)組)
下部24ml血漿
上部11.7ml A液
70,000rpm×8hrs
16℃
加速:5
減速:7
同上
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
LDL(含IDL)分離(1.006g/cm3<ρ<1.063g/cm3
 
轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
*次離心后上部VLDL取出,下部600μl移入另一離心管,加入300μl B液,充分混合
140,000rpm×80min
16℃
加速:9 減速:7
上部1/3體積LDL+IDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL)
*次離心后上部VLDL吸出,,下部3.4ml移入另一離心管,加入1.7ml B液并充分混合
80,000rpm×5.5hrs
16℃
加速:9減速:7
上部1/3體積LDL+IDL吸出
P70AT
(CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型)
*次離心后上部11.7ml吸出,下部約24ml 移入另一離心管,加入11.7ml B液,充分混合
70,000rpm×10hrs
16℃
加速:9 減速:6
上部1/3體積LDL+IDL吸出
 
HDL分離(1.063g/cm3<ρ<1.21g/cm3
 
轉(zhuǎn)頭
離心管內(nèi)液體分布
離心參數(shù)
結(jié)果
S140AT
(CS-150GXL機(jī)組)
第二次離心后吸出上部300μl后,下部600μl移入另一離心管,加入300μl C液,充分混合
140,000rpm×140min
16℃
加速:9
減速:7
可見較明顯分層,
上部為HDL,下部為血清白蛋白及球蛋白
S80AT3
(CS-150GXL機(jī)組)
第二次離心后吸出上部約1.7ml、下部3.4ml移入另一離心管,加入1.7ml C液,充分混合
80,000rpm×8小時(shí)
16℃
加速:9
減速:7
可見較明顯分層,
上部為HDL,下部為血清白蛋白及球蛋白
P70AT
(CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組)
第二次離心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一離心管,加入約12ml C液,充分混合
70,000rpm×15小時(shí)
16℃
加速:9
減速:6
可見較明顯分層,
上部為HDL,下部為血清白蛋白及球蛋白
 

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