H5亞型禽流感病毒IgG抗體檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品簡介】

禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)的一種急性接觸性病毒性傳染病。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感發(fā)生的zui有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。

在種雞預(yù)防免疫工作中,zui值得關(guān)注的就是強(qiáng)化免疫的接種時機(jī)問題。在兩次免疫的間隔時間里,種雞的抗體水平會隨著時間逐漸下降,而在何種水平進(jìn)行強(qiáng)化免疫是一個令人頭疼的問題。因?yàn)樵谶^高的抗體水平進(jìn)行免疫,不僅浪費(fèi)疫苗,增加了經(jīng)濟(jì)成本,而且過高的抗體水平還會中和疫苗,影響疫苗的免疫效果,導(dǎo)致免疫失敗；但是在較低的抗體水平進(jìn)行免疫,又會出現(xiàn)抗體保護(hù)真空期,威脅種雞的健康。

本產(chǎn)品適用于不同品種、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測?？捎糜谇萘鞲校ㄈ《荆┮呙缑庖咝Чu價、免疫時間的確定分析、地區(qū)雞群禽流感免疫狀況評價等。

【原    理】

本品系由包被H5亞型禽流感病毒重組抗原的微孔板和酶標(biāo)記抗雞IgG及其他試劑組成，應(yīng)用酶免間接法原理（ELISA）檢測雞血清或血漿中H5亞型禽流感病毒 IgG抗體。

【試劑盒組成】

【使用方法】

1. 使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2. 取所需用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3. 陰性、陽性對照孔分別加陰性、陽性對照血清100μl；用樣品稀釋液以200倍的比例分別稀釋要檢測的血清樣品，稀釋后每孔加100μl；空白對照孔不加。
4. 混勻，置37℃溫浴30分鐘。
5. 扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6. 每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。
7. 置37℃溫浴30分鐘。
8. 洗滌，同步驟5。
9. 每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

10.  每孔加終止液50μl，混勻，置酶標(biāo)儀450nm處測各孔A值（建議用雙波長450nm、630nm）。

【結(jié)果判定】

1. 陰性對照：正常情況下，陰性對照孔A值≤0.1；
2. 陽性對照：正常情況下，陽性對照孔A值≥0.6；
3. 結(jié)果判定：

   檢測標(biāo)本A₄₅₀值≥0.5即血凝滴度≥6log2時有很好的保護(hù)；

0.4＞A₄₅₀≥0.3相應(yīng)血凝滴度為4log2，有一定保護(hù)力

當(dāng)A₄₅₀≤0.4時建議加強(qiáng)免疫（10個血凝效價時A₄₅₀在1.0左右）

【注意事項】

1. 操作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
2. 試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3. 樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
4. 洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
5. 所有樣品洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
6. 微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可，未用完的微孔板須放入有干燥劑的密封袋中保存。
7. 用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
8. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
9. 不同批號試劑組分不得混用。

【保存與有效期】

于2～8℃避光保存，有效期自成品檢定合格之日起為12個月。