分析方案

概述

準備細胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分鐘至2小時

在熒光顯微鏡下Ex / Em = 360 / 445nm（DAPI濾光片組）處進行分析

操作方法

1.準備溶酶體染色溶液：

1.1解凍LysoBrite Blue（組分A）至室溫。

1.2通過將20μLLysoBrite Blue（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μLLysoBrite NIR（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite Blue（組分A）等分并儲存在<-20℃。 避光，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據(jù)具體應用而變化。 可以根據(jù)特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有Dapi過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1,000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有Dapi過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色（見步驟2.1）。

圖1.使用Cell Navigator 溶酶體染色試劑盒染色的U2OS細胞圖像* Costar黑色96孔板中的藍色熒光*