日本不卡高清免v一道本,久久中文字幕乱码久久午夜

雙色熒光檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測細(xì)菌的試劑盒，AAT Bioquest的MycoLight™ Fluorescence Live/Dead Bacterial Imaging Kit提供雙色熒光檢測，通過熒光顯微鏡觀察活細(xì)菌和死細(xì)菌。MycoLight 520是一種非熒光酯酶底物，可擴(kuò)散到革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中。在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解后，產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物并在細(xì)菌內(nèi)積累。相比之下，碘化丙錠是一種紅色熒光核酸染色劑，只能穿透受損膜的細(xì)菌。因此，使用MycoLight 520和碘化丙錠染料的適當(dāng)混合物，具有完整細(xì)胞膜的活細(xì)菌發(fā)出綠色熒光，而具有受損膜的死細(xì)菌產(chǎn)生紅色熒光。是一種用于對活/死細(xì)菌進(jìn)行成像的強(qiáng)大工具?？梢栽贓x / Em = 488 / 525nm（FITC濾光器組）和540 / 620nm（TRITC濾光器組）下熒光測量染色細(xì)胞，分別用于活細(xì)菌和死細(xì)菌。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的雙色熒光檢測試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

染色樣品示例

概述

1.準(zhǔn)備100X MycoLight 520原液
2.準(zhǔn)備細(xì)菌樣本
3.加入MycoLight 520和碘化丙錠
4.將細(xì)菌樣品與MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分鐘或在室溫下孵育60分鐘
5.用FITC和TRITC濾光片組通過熒光顯微鏡分析樣品
注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分

操作步驟

在沒有額外說明的情況下，所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1.MycoLight 520原液（100X）：
將100μLDMSO（組分D）加入MycoLight 520（組分A）的小瓶中。
注意：將儲備溶液儲存在-20°C，避免光照，反復(fù)凍融。

2.制備濃度為106至108個細(xì)胞/ mL的細(xì)菌樣品。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中將細(xì)菌培養(yǎng)到對數(shù)晚期。

注意：測量波長= 600 nm（OD600）的細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度以確定細(xì)胞數(shù)。對于大腸桿菌培養(yǎng)物，OD 600 = 1.0等于8×108個細(xì)胞/ ml。

3.通過以10,000xg離心10分鐘除去培養(yǎng)基，并將沉淀重新懸浮在測定緩沖液（組分C）中。

4.通過用70％乙醇處理30分鐘，然后煮沸60分鐘，可以制備死細(xì)菌。

5.染色

以下是推薦的方案，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。如果觀察到更高的背景，可以在成像之前添加任選的洗滌步驟。

5.1將1μL100XMycoLight 520原液和1μL100X碘化丙啶（組分B）加入到100μL測定緩沖液中的細(xì)菌樣品中。
5.2充分混合并在37℃下在黑暗中孵育5-10分鐘或在室溫下孵育60分鐘以獲得佳染色結(jié)果。
5.3通過FITC（Ex / Em = 488 / 530nm）和TRITC（Ex / Em = 540 / 620nm）通道用熒光顯微鏡監(jiān)測細(xì)菌的熒光。