分析方案

概述

準備樣品（微孔板孔）

從板上取下液體加入100μL/孔的iFluor 350-Phalloidin溶液

在室溫下染色細胞15到60分鐘

洗滌細胞

在Ex / Em = 350 / 450nm下在顯微鏡下觀察樣品

操作方法

1.準備1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽工作溶液：

將10μL的iFluor 350-鬼筆環(huán)肽（組分A）加入10mL標記緩沖液（組分B）中。

注1：未使用的iFluor 350-鬼筆環(huán)肽原液（組分A）應等分并保存在-20℃，避光。

注2：不同的細胞類型可能染色不同。應相應地制備iFluor 350-鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度。

2.染色細胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定。在室溫下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育細胞10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。用PBS沖洗細胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）的1X iFluor™350-鬼筆環(huán)肽工作溶液（來自步驟1）加入固定的細胞（來自步驟2.2或2.3），并在室溫下染色細胞15至60分鐘。

2.5用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以去除多余的染料，然后使用DAPI通道進行板密封和成像。

圖1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌動蛋白標記試劑盒染色的CPA細胞的圖像*在Costar黑色96孔板中的藍色熒光* A：用1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽標記細胞僅30分鐘。 B：用鬼筆環(huán)肽處理細胞10分鐘，然后用1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽染色30分鐘。