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級(jí)別	其他

Screen Quest 膜電位檢測(cè)試劑盒橙色熒光 膜電位是細(xì)胞內(nèi)外的電壓差。膜電位使細(xì)胞發(fā)揮電池的作用，為各種嵌入膜內(nèi)的“分子器件"提供動(dòng)力。在神經(jīng)元等電興奮性細(xì)胞中，膜電位被用來在細(xì)胞的不同部位傳遞信號(hào)。在膜的某一點(diǎn)上打開或關(guān)閉離子通道會(huì)使膜電位發(fā)生局部變化，從而使電流迅速流向膜的其他點(diǎn)。離子通道已被確定為重要的藥物發(fā)現(xiàn)靶點(diǎn)。我們的Screen Quest 膜電位檢測(cè)試劑盒是一種具有快速讀取的均相檢測(cè)方法。它使用我們專有的長波長膜電位指示劑檢測(cè)由離子通道的打開和關(guān)閉引起的膜電位變化。試劑盒中使用的膜電位指示劑的紅色熒光增強(qiáng)了進(jìn)入細(xì)胞的熒光，并將篩選化合物和細(xì)胞自身熒光造成的干擾降至。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Screen Quest 膜電位檢測(cè)試劑盒橙色熒光。

適用儀器

熒光酶標(biāo)儀
Ex:	530 nm
Em：	570 nm
Cutoff：	550 nm
推薦孔板:	黑色透明底板
讀取模式:	底部讀取/分液處理

其他可用儀器
FDSS、FLIPR、FlexStation、NOVOStar

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

在生長培養(yǎng)基中準(zhǔn)備細(xì)胞
添加MP染料工作液
在室溫下孵育30至60分鐘
檢測(cè)添加膜電位后化合物的熒光變化

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

1.分析緩沖液原液（1X）：將1 mL的10X分析緩沖液（組分B）添加到9 mL的HHBS中（組分C，不包括#36001），并充分混合。注意：10 mL的1X分析緩沖液足以用于1個(gè)板。

工作溶液配制

將15 uL的MP Sensor（組分A）添加到10 mL的1X 分析緩沖液儲(chǔ)備溶液中并充分混合。該工作溶液在室溫下穩(wěn)定至少兩個(gè)小時(shí)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）MP染料工作溶液添加到細(xì)胞板中。注意：如果您的篩選化合物干擾了生長培養(yǎng)基和血清因子，那么在添加MP染料工作溶液之前，用等體積的HHBS緩沖液替換生長培養(yǎng)基。或者，細(xì)胞可以在無血清條件下生長。注意：上色后請(qǐng)勿清洗細(xì)胞。

2.在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育工作溶液板30分鐘。注意：在某些情況下，在室溫下孵育30至60分鐘可能會(huì)更好。

3.通過使用HHBS或所需的緩沖液來準(zhǔn)備復(fù)合板。

4.在加入化合物的前后，使用熒光酶標(biāo)儀中的內(nèi)置液體處理器，通過檢測(cè)Ex / Em = 530/570 nm處的熒光來運(yùn)行膜電勢(shì)測(cè)定。注意：在實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行信號(hào)測(cè)試非常重要，不同的儀器具有各自的強(qiáng)度范圍。將信號(hào)測(cè)試強(qiáng)度調(diào)整為大儀器強(qiáng)度計(jì)數(shù)的10％到15％。例如，F(xiàn)LIPR-384的大熒光強(qiáng)度計(jì)數(shù)為65,000，因此應(yīng)調(diào)整儀器設(shè)置，使其信號(hào)測(cè)試強(qiáng)度約為7,000至10,000。

圖示

圖1.用P2X受體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的HEK細(xì)胞中的ATP劑量反應(yīng)。用P2X受體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的HEK細(xì)胞以40,000個(gè)細(xì)胞/ 100 µL /孔的速度在Costar黑墻/透明底部96孔板中過夜接種。將細(xì)胞與100 µL MP染料上載溶液在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育60分鐘。 FlexStation添加了ATP（50 µL /孔）以達(dá)到指示的濃度。用底部讀取模式在Ex / Em = 530/570 nm（在550 nm處截止）下測(cè)量熒光信號(hào)。