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豬口蹄疫病毒抗體（IgG）ELISA診斷試劑盒說明書

時間：2012/4/10閱讀：1051

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬口蹄疫病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Porcine Foot and Mouth Disease Virus Antibody Test Kit （ELISA）, FMDV Ab

【包裝規(guī)格】

96×1測試/盒

【預期用途】

本試劑盒用于定性測定豬血清中O型口蹄疫病毒IgG抗體。用于評估豬場豬口蹄疫疫苗免疫狀況，感染豬的血清學診斷以及豬口蹄疫的流行病學調(diào)查。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬口蹄疫抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的FMDV-IgG結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+FMDV-IgG+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與FMDV-IgG的量成正比，當顯色超過設定的臨界值時結果判為陽性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要組成成份】

1．	FMDV抗原包被板	96T×1塊	包被有FMDV抗原
2．	酶標記物（黃蓋）	22ml×1瓶	含辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG抗體
3．	樣本稀釋液（透明蓋）	50ml×1瓶	主要成份為0.01M PBS緩沖液
4．	濃縮洗滌液（20×）（白蓋）	50ml×1瓶	PBST緩沖液，用前用去離子水20倍稀釋
5．	FMDV-IgG陰性對照血清（綠蓋）	1.5ml×1瓶	主要成份為FMDV-IgG陰性血清
6．	FMDV-IgG陽性對照血清（紅蓋）	1.5ml×1瓶	主要成份為FMDV-IgG陽性血清
7．	顯色劑A（紫蓋）	12ml×1瓶	主要成份為過氧化脲
8．	顯色劑B（黃蓋）	12ml×1瓶	主要成份為TMB
9．	終止液（藍蓋）	12ml×1瓶	主要成份為HF
10．	蓋板膜	6張
11．	說明書	1份

不同批號的試劑組份不可混用。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個月。

【適用儀器】

1．酶標儀，單波長630nm測量。

2．ELISA用洗板機。

3．微量移液器。

4．水浴箱或恒溫箱。

5．微量振蕩器。

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。

3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。

【檢驗方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。設空白對照1孔（不加任何液體）；設陰、陽性對照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μL于相應孔中。其余為樣本孔，用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后混勻（如將6μL樣本加到234μL樣品稀釋液中），每孔加入稀釋好的樣本100μL。

2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應板孔，洗滌3次，每次停留3分鐘，zui后一次洗后拍干。

4．加酶：每孔加酶標記物100ul，注意：空白孔不加酶標記物，也不加其他任何液體。

5．溫育：置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同上洗滌。

7．顯色：每孔加顯色劑A、B各50ul，振蕩混勻，室溫（25℃）避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50ul，振蕩10秒，充分混勻。終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。

9．讀數(shù)：用酶標儀單波長630nm以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結果均應減去空白孔A值再做判定。

10．結果判定：

樣品A值大于0.4，判為FMDV-IgG陽性；樣品A值在0.2到0.4之間，判為FMDV-IgG可疑；樣品A值小于0.2，判為FMDV-IgG陰性。

陰性對照血清A值應小于0.20，陽性對照血清A值應大于或等于0.40，否則試驗不成立，需重新試驗。

注意：若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則上述所有測得的結果均應減去空白孔A值再做判定。

【參考值（參考范圍）】

未自然感染也未被免疫豬口蹄疫病毒疫苗的健康豬群為陰性，A值小于0.2。

【檢驗結果的解釋】

1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導致假陽性。

2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別豬只免疫疫苗后檢測結果為陰性。

3．陽性結果用于感染豬的血清學診斷以及的流行病學調(diào)查時需結合其他方法和臨床資料進行。

【檢驗方法的局限性】

FMDV-IgG可作為評價豬口蹄疫疫苗免疫效果以及豬口蹄疫病毒感染的血清學診斷指標，但不能區(qū)別二者，若想確認是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結合臨床資料、免疫程序或口蹄疫野毒鑒別ELISA試劑盒來區(qū)分。

【產(chǎn)品性能指標】

1．特異性以本品檢測30份陰性參比血清不出假陽性。

2．敏感性以本品檢測30份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。

3．精密性用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。

4．穩(wěn)定性試劑盒在2℃～8℃放置6個月或37℃放置3天，檢定結果達到以上1-3標準。

【注意事項】

1．本試劑盒僅用于體外診斷。

2．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，操作時需戴手套穿工作衣。

3．實驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。

6．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。

7．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

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