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Biosharp BL698A熒光定量PCR試劑盒（5X1mL）

廠家介紹：

Biosharp BL698A 熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green qPCR Mix）

品牌：biosharp

貨號：BL698A

規(guī)格：5X1mL

本產(chǎn)品是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進行Real Time PCR的試劑，將熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等試劑預(yù)混成即用的2x Mix，可對目標cDNA進行快速并具有高特異性的定量檢測。本產(chǎn)品采用化學(xué)修飾的Hot Start Taq DNA聚合酶，在 50 ℃以下無活性，只有 95 ℃條件下加熱后才能*恢復(fù)酶的活力，Z大限度減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的精確性。該試劑盒*的反應(yīng)緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴增結(jié)果、檢測靈敏度更高、信號更強。

產(chǎn)品組分：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
1	2×SYBR Green qPCR Mix	5 x 1ml
2	50×ROX Reference Dye	1ml

保存條件：

收到本產(chǎn)品后，請立即置于-20℃避光保存，一年有效，2～8℃條件下儲存6個月，避免反復(fù)多次凍融。

使用說明：

一、配制 Real-Time PCR反應(yīng)體系：

1、將所有試劑2×SYBR Green qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH₂O，在室溫下融解并*混勻，避免產(chǎn)生氣泡。短暫離心后，置于冰上按照下表配制反應(yīng)液。

參考下表配制反應(yīng)體系：

組分	20ul體系	終濃度
SYBR Green qPCR Mix	10μl	1×
Primer F (10 μM)*	0.4~0.8 μl	0.2~0.4 uM*
Primer R (10 μM)*	0.4~0.8 μl	0.2~0.4 uM*
50 x ROX Reference Dye**	－	－
cDNA模板	－	--
RNase-Free ddH₂O	至20 μl	－

* 一般來說反應(yīng)體系中引物終濃度為0.2 uM即可得到較好的擴增效果。當(dāng)反應(yīng)性能比較差時，可以在終濃度0.2~0.4 uM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

** 幾種常見儀器的Z適ROX Reference Dye濃度見下表：

儀器型號	使用濃度
ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/ StepOne Plus等	5×
ABI 7500/7500 Fast、QuantStudio ® 3/5、QuantStudio 6/7 Flex、ViiA 7、Stratagene Mx3000P/Mx3005P和Mx4000等	1×
Roche、Bio-Rad、Eppendorf等	無需添加

2、蓋上或密封反應(yīng)管/PCR板，輕輕混勻。短暫離心，確保所有組分都在管/板底。

二、進行Real-Time PCR反應(yīng)

1、建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進行反應(yīng)。

兩步法反應(yīng)程序:

步驟	溫度	持續(xù)時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	5min	1
變性	95℃	10sec	40
退火延伸數(shù)據(jù)采集	60℃	30sec	40
熔解曲線分析	根據(jù)儀器程序設(shè)置

當(dāng)模板量較低等因素導(dǎo)致擴增效果不佳，可使用三步法程序進行PCR反應(yīng)。

三步法反應(yīng)程序:

步驟	溫度	持續(xù)時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	5min	1
變性	95℃	10sec	40
退火	50-60℃	30sec	40
延伸數(shù)據(jù)采集	72℃	30sec	40
熔解曲線分析	根據(jù)儀器程序設(shè)置