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真正的解決方案----懸浮細胞/微珠高通量篩選
高內(nèi)涵篩選通過提供豐富的數(shù)據(jù)促進藥物的開發(fā)，成為藥物研發(fā)過程的常規(guī)流程。然而高內(nèi)涵篩選僅僅局限于貼壁細胞，無法觸及到更多的重要研究領(lǐng)域，美國InliCyt推出iQue Screener篩選系統(tǒng)可分析懸浮細胞和微珠，為當今的篩選實驗提供快速的高內(nèi)涵的實驗數(shù)據(jù)

• 通過對懸浮細胞進行高通量的功能性篩選，增加表型篩選實驗中小分子藥物開發(fā)的效率；
• 通過同時獲取抗原結(jié)合和交叉反應(yīng)的數(shù)據(jù)，從抗體開發(fā)研究中獲得更好的雜交瘤信息，并且篩選目標都保持在它們的自然構(gòu)型狀態(tài)中。
• 確保更多的體外毒性的預(yù)測結(jié)果可通過全自動的、多終點的實驗設(shè)計得到，這種實驗每秒可分析上千個獨立細胞的健康特性。

 整合的解決方案

*整合儀器、軟件和試劑盒的篩選解決方案，使研究者可以用篩選的速度和效率分析懸浮細胞。
iQue^TM Screener如何運行
iQue^TM篩選系統(tǒng)是高通量的、基于流式細胞儀的篩選平臺，運送一個連續(xù)的樣本流給檢測器，后者從單個的細胞中收集多重讀數(shù)。這種*的進樣方法可將細胞或其他內(nèi)含物以連續(xù)的、空氣間隔的方法，從微孔板中輸送到流式細胞儀中，以確保準確的跟蹤，并將交叉污染zui小化。zui終的檢測結(jié)果只需要幾分鐘，而不是幾個小時，并能以易于解讀的熱圖（heat map）形式形成基于微孔板的實驗結(jié)果。


iQue^TM Screener的特點
更高的實驗效率

• 在幾天內(nèi)篩選您的文庫，而不是幾個月
• 進樣體積可低至1µL，減少試劑的成本
• 可在3min內(nèi)運行一塊96孔板，在12min內(nèi)運行一塊384孔板
• 可以與機械臂和其他自動工作單元相整合
• 兼容細胞、微珠和它們的混合物

更多的生理相關(guān)性

• 可對不同細胞的混合物進行分析，讀取單個細胞數(shù)據(jù)
• 可篩選懸浮細胞，并篩選自然構(gòu)象的目標物
• 用四個熒光通道收集多重讀數(shù)
• 可檢測非標記目標物的尺寸和粒度

 
更穩(wěn)定的實驗結(jié)果
 

• 6個數(shù)量級的檢測范圍可提供靈敏和可靠的實驗結(jié)果
• 10,000個獨立的細胞，可得到每孔內(nèi)的更好的統(tǒng)計數(shù)據(jù)

 
更易于使用

• 完整的工作流程的支持
• 分析實時動態(tài)
• 生成即時報告
• 即插即用的應(yīng)用特異性試劑盒

超高通量，您強勁的幫手
應(yīng)用
抗體開發(fā)（Antibody Discovery）

• 雜交瘤篩選（Hybridoma Screening）
• 決定種系間的交叉反應(yīng)性（Determining Species Cross-Reactivity）
• 評估抗體分泌細胞系的生產(chǎn)效率（Assessing Productivity of Antibody-Secreting Cell Lines）
• 篩選人生殖細胞IgG庫（Screening a Human Germline IgG Library）

體外毒性實驗（In Vitro Toxicology）

• 微核誘導(dǎo)的定量（Quantification of Micronucleus Induction）
• 凋亡事件的檢測（Detection of Apoptotic Events）

表型篩選（Phenotypic Screening）

• 對誘導(dǎo)骨髓祖細胞分化的化合物的篩選（Screening for Compounds that Induce Myeloid Progenitor Cell Differentiation）
• 多重細胞系的GFP表達篩選（GFP Expression Screening in Multiple Cell Lines） 
   

抗體開發(fā)
InliCyt的篩選系統(tǒng)結(jié)合MultiCyt試劑盒，可以同時檢測多個終點，有助于對克隆庫里的抗體進行高通量的鑒別和描述。此外，應(yīng)用懸浮細胞進行分析的能力，使目標物質(zhì)能在它們的自然構(gòu)型下進行篩選，從而能獲得更好的雜交瘤的信息。 
雜交瘤篩選
InliCyt的篩選系統(tǒng)和MultiCyt Hybridoma Screening Kit試劑盒的結(jié)合使用，可以優(yōu)化整個實驗流程。這種混合然后檢測的實驗方法消除了初篩中現(xiàn)有的很多步驟，能同時評估抗原的結(jié)合和交叉反應(yīng)特性。

目標細胞（未標記）和對照細胞（鈣黃綠素標記）混合在一起并分布在微孔板中。然后加入雜交瘤庫中的被測抗體，和帶紅色熒光的檢測抗體一起孵育。然后用iQue分析微孔板，同時檢測雜交瘤懸浮液中的抗體和目標細胞、對照細胞群體的結(jié)合。和對照細胞的結(jié)合表現(xiàn)了交叉反應(yīng)性和非特異性結(jié)合性，為每個孔的實驗提供了內(nèi)部對照。

未處理的細胞的實驗使抗體篩選可以在有構(gòu)象的表位上進行，這在ELISA和其他純化蛋白質(zhì)實驗中是無法做到的，因為抗原在純化的過程中會經(jīng)常失去折疊而失活。
決定種系間的交叉反應(yīng)性
InliCyt篩選系統(tǒng)的多重功能可以將抗體的跨種系反應(yīng)活性融入到研發(fā)的篩選流程中。MultiCyt Cell Encoder Kit試劑盒允許每孔同時檢測五種細胞系。該實驗?zāi)苋菀椎罔b定出能與多種種系的目標抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的高度合適的克隆，這些克隆就是臨床前研究的更強有力的候選物。

親代細胞系和經(jīng)過基因工程改造的能表達小鼠、大鼠、獼猴和人類受體的細胞系被分別標記并混合在一個樣本中。其中，未轉(zhuǎn)染的親代細胞系作為每個樣本的陰性結(jié)合對照。樣本被加入96孔微孔板進行抗體結(jié)合實驗，然后依次加入初篩檢測抗體和二篩檢測抗體。實驗結(jié)束后，每個樣本的細胞系得到確認，并被單獨評估，生成結(jié)合親和力曲線。該實驗4塊96孔微孔板中進行，得到了4種不同實驗條件下的12種抗體，8個劑量的曲線，所有實驗在1小時內(nèi)完成。
評估抗體分泌細胞系的生產(chǎn)效率
InliCyt篩選系統(tǒng)的多重功能和Multi-Cyt IgG Count and Capture Kit試劑盒合用，可提高成功確認高生產(chǎn)率細胞系的機會。在單個實驗中，通過同時檢測分泌的抗體量、細胞數(shù)目和細胞活性獲得單個細胞的抗體水平。

樣本中分泌的抗體結(jié)合到捕獲微珠上，被熒光標記的檢測試劑所檢測。加入一種特異性標記非活性細胞的染料，以確定活性細胞和非活性細胞的比值。分析微孔板，每個樣本同時記錄三個讀數(shù)：分泌的抗體的水平，總細胞數(shù)目和非活性細胞的百分比。這樣就能容易的算出每個細胞分泌的抗體水平。
篩選人生殖細胞IgG庫
用InliCyt篩選系統(tǒng)可以進行篩選方法的開發(fā)，這種篩選方法適合細胞表面表達的抗原，并能檢測多重終點。Fabrus Inc.公司（San Diego, California）開發(fā)了一個人生殖細胞Fab庫，并進行了大約10,000個IgG對哺乳動物細胞表面目標抗原的直接篩選。其使用HTFC篩選系統(tǒng)進行，使目標IgG可以在脂質(zhì)細胞膜表面的天然環(huán)境中進行篩選。

細胞用GFP和目標抗原進行短暫共轉(zhuǎn)染，然后每一個群組，表達三個不同目標抗原中的一個，用一定數(shù)量的鈣黃綠素作為細胞編碼染料進行標記。轉(zhuǎn)染好的標記細胞被物理混合成單個樣本，分裝在微孔板上，進行針對這些樣本的IgG庫的篩選。GFP的信號用來確認細胞是否表達了抗原，細胞編碼染料使三種細胞能同時進行實驗，以確認和分析每一個目標物。GFP陰性的細胞作為不表達目標抗原的內(nèi)部陰性對照。結(jié)合在細胞上的IgG用熒光進行二次檢測，并且對每一個染色的群組進行了評估。
體外毒性實驗
IntlliCyt的篩選系統(tǒng)可在1秒鐘內(nèi)分析溶液中幾千個細胞的健康性能，使用MultiCyt試劑盒全自動的簡化工作流程為藥物開發(fā)提供早期的有關(guān)基因毒性的篩選途徑。
微核誘導(dǎo)的定量
在InliCyt的篩選系統(tǒng)上進行體外微核實驗，用Litron（羅切斯特，紐約）的體外MicroFlow Kit試劑盒可以可靠地檢測基因毒性化合物引起的懸浮細胞和貼壁細胞的微核的改變。384微孔板結(jié)合自動化分析時，原來需要16個小時才能完成的實驗現(xiàn)在只要30分鐘就能完成，使微核誘導(dǎo)實驗?zāi)苓_到篩選級別的高通量。
檢測凋亡事件
InliCyt的系統(tǒng)、軟件和應(yīng)用試劑盒被優(yōu)化和確認來對多重凋亡終點進行識別和特征描述。同時或以不同的組合方式監(jiān)控Caspase 3，Annexin V，線粒體去極化，細胞活性和細胞數(shù)目等指標，以得到各終點間的更好的相關(guān)性和更完整的凋亡進程圖。復(fù)雜的細胞混合物也能被監(jiān)控，以獲得不同的差異效率。

表型篩選
對誘導(dǎo)骨髓祖細胞分化的化合物的篩選
InliCyt篩選系統(tǒng)可以篩選克服原骨髓祖細胞的分化停滯的生物相關(guān)化合物，并能容易地確定能刺激干細胞分化的化合物，同時消除顯示細胞毒性的化合物。

細胞系來源于基因改造小鼠，該小鼠在溶菌酶啟動子的控制下表達GFP：分化的細胞表達GFP（GFP+），未分化的細胞不表達GFP（GFP-）。同時篩選350,000個化合物作用下的細胞活性、細胞數(shù)目和綠色熒光。通過測量每個孔的前向散射，側(cè)向散射和細胞數(shù)目，無須活性染料就可確定毒性化合物，并同時確定GFP+。微孔板熱圖（Plate heat maps）能同時研究能誘導(dǎo)分化的化合物（用GFP陽性的細胞表示）（GFP+ plate）、細胞毒性（用細胞的損失來表示）和包含多重參數(shù)的比值（創(chuàng)造出來用于設(shè)定篩選標準）。
多重細胞系的GFP表達篩選
和許多已知的GFP模型相兼容，InliCyt的篩選系統(tǒng)能在懸浮和貼壁細胞上進行高通量群組的表型分析?？梢源_定和定量暫時轉(zhuǎn)染的細胞群組中的表達GFP的細胞。

簡化群組的表型篩選流程使多重終點能被連續(xù)的分析，得到更多數(shù)據(jù)（如：活細胞的GFP信號），或作為單一的終點被平行分析（細胞存活百分比和細胞表達百分比）。

對微孔板的每個樣本，多重數(shù)據(jù)可產(chǎn)生更加生物相關(guān)的信息以進行數(shù)據(jù)評估。Lipofectamine（LF2K）轉(zhuǎn)染試劑對HepG2細胞的三倍（triplicate）實驗。