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上海金穗生物科技有限公司

親和細(xì)胞化學(xué)和級聯(lián)抗體信號放大技術(shù)

時間:2012-9-2閱讀:1899
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 (一)親和細(xì)胞化學(xué)方法斷

 
    該方法的基本原理見本書第五章“親和免疫組織化學(xué)技術(shù)”。將各種可標(biāo)記的熒光染料標(biāo)記在*或鏈霉親和素(streptavidin)上,通過*化二抗與特異性一抗結(jié)合,鏈霉親和素—熒光染料再與二抗上的*結(jié)合,使更多的熒光染料結(jié)合到抗原抗體部位,此時如熒光信號不夠強,還可用*化熒光染料與未飽和的鏈霉親和素結(jié)合,使信號得到進一步放大。
 
    如果還想對信號作進一步放大,可用抗熒光素的標(biāo)記熒光二抗,或用*標(biāo)記抗親和素二抗,然后再用熒光素標(biāo)記鏈霉親和素,其原始信號能更進一放大。
 
    (二)級聯(lián)抗體放大法
 
    級聯(lián)抗體放大法是利用現(xiàn)有的抗熒光素、抗第二抗體和抗半抗原(*、地高辛等)抗體對信號進行放大。例如間接法免疫熒光染色(FITC)后,可用抗FITC標(biāo)記熒光素與FITC結(jié)合,也可用抗FITC標(biāo)記AKP使其改變顏色,還可以用抗標(biāo)記有熒光素的二抗與間接法上二抗結(jié)合,使信號進一步放大。
 
    放大信號的步驟越多,其敏感性肯定越高,但其特異性可能會得不到有效保證。目前上述試劑均有商品化供應(yīng),只有合理使用,級聯(lián)放大作用才能發(fā)揮zui大效果,使非特異性染色降低到zui低。

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