細(xì)胞分裂指數(shù)測(cè)定

時(shí)間：2014/11/21閱讀：699

一、原理

體外培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力，可用分裂指數(shù)來(lái)表示。它與生長(zhǎng)曲線有一定的，如隨著分裂指數(shù)的不斷提高，細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生。

分裂指數(shù)指細(xì)胞群體中分裂細(xì)胞所占的百分比，它是測(cè)定細(xì)胞周期的一個(gè)重要指標(biāo)，也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器與用品：CO2培養(yǎng)箱、普通顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)血、蓋玻片、吸管

2、試劑：培養(yǎng)液、、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液

三、操作步驟

1、消化細(xì)胞，將細(xì)胞懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。

2、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，使細(xì)胞長(zhǎng)在蓋片上。

3、取出蓋片，按下列順序操作：

PBS漂洗3分鐘→甲醇：冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來(lái)水沖洗。

4、蓋片晾干后反扣在載玻片上，鏡檢。

5、計(jì)算：

分裂指數(shù)=分裂細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×

四、注意事項(xiàng)

操作時(shí)動(dòng)作要輕，以免使蓋片上的細(xì)胞脫落。

附：Giemsa染液配制：

稱Giemsa粉末0.5克，加幾滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油總量為33ml）。56℃中保溫90-120分鐘。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存，此為Giemsa原液。

使用時(shí)按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。

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