T7Select? 噬菌體展示系統(tǒng)是Novagen開(kāi)發(fā)的基于T7噬菌體(而非傳統(tǒng)的M13)創(chuàng)新的基因發(fā)現(xiàn)研究產(chǎn)品。目的序列(C-端)與T7基因10 衣殼蛋白而表達(dá)得到的多肽和蛋白即可暴露(展示)與病毒(T7噬菌體)的表面。復(fù)制周期短，細(xì)胞質(zhì)蛋白組裝，操作和儲(chǔ)存方便，超高克隆效率，以及T7噬菌體強(qiáng)大的天然特性使Novagen的T7Select成為替代傳統(tǒng)M13系統(tǒng)的更好選擇，用于文庫(kù)構(gòu)建和親和淘洗。由于T7噬菌體展示系統(tǒng)能構(gòu)建和篩查更大的文庫(kù)，能使研究者更有可能發(fā)現(xiàn)“滄海一粟"的目標(biāo)分子。
該系統(tǒng)以多種產(chǎn)品形式提供，包括T7Select噬菌體克隆試劑盒，包含OrientExpress? cDNA合成的試劑盒以及T7Select噬菌體克隆系統(tǒng)。
另有12種預(yù)制人正常組織和病理組織來(lái)源的cDNA文庫(kù)提供，這些文庫(kù)都是用T7Select10-3載體構(gòu)建的。
T7噬菌體展示系統(tǒng)與M13系統(tǒng)有什么區(qū)別？
M13和T7噬菌體zui大的區(qū)別就在于成熟病毒從宿主細(xì)胞中釋放的方式不同。M13噬菌體在周質(zhì)中組裝，必須經(jīng)細(xì)胞膜分泌；而T7在細(xì)胞質(zhì)中完成組裝后直接從細(xì)胞裂解出來(lái)。因此，任何抑制分泌過(guò)程的蛋白和多肽都不能在M13系統(tǒng)中展示，或展示效果很差。例如，具有帶電荷氨基酸殘端的疏水蛋白、肽或多肽等，會(huì)因穿膜困難而無(wú)法展示。T7文庫(kù)則不受這種序列限制，而且，一般來(lái)說(shuō)T7展示系統(tǒng)表達(dá)蛋白或多肽的種類(lèi)要比M13這樣的絲狀噬菌體更多。
T7比M13*主要還是表現(xiàn)在易于操作、表達(dá)能力以及親和淘洗富集等方面。T7雖然要求體外包裝但生長(zhǎng)極為迅速。T7噬斑形成僅需3小時(shí)，比M13系統(tǒng)節(jié)約整整1天。M13則在測(cè)序方面比T7更方便。
T7噬菌體極為穩(wěn)定，能在各種嚴(yán)酷的條件下不被破壞，而其它噬菌體常在親和淘洗的過(guò)程中失去活性。因此，在T7系統(tǒng)的結(jié)合/洗脫過(guò)程中，可選用的試劑種類(lèi)較廣泛，親和淘洗后噬菌體仍然保持很高的感染活性。
產(chǎn)品應(yīng)用
許多基于多肽或蛋白功能來(lái)獲得其編碼cDNA的研究多可以選用噬菌體展示技術(shù)，例如：
蛋白相互作用(例如激素，抗體，受體)
酶分析，酶抑制
核酸-蛋白相互作用
抗原決定簇作圖
突變分析
特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)
| *的產(chǎn)品 | 是*采用T7為載體的噬菌體展示系統(tǒng)，沒(méi)有市售同類(lèi)產(chǎn)品。 |
| *的預(yù)制文庫(kù) | 預(yù)制cDNA文庫(kù)是Novagen*的親和掏洗產(chǎn)品，其它商業(yè)化親和掏洗文庫(kù)是多肽文庫(kù)而非cDNA文庫(kù)。 |
| 操作方便 | 提供完備的cDNA合成、克隆、包裝、表達(dá)和親和掏洗的高質(zhì)量試劑盒以及詳細(xì)的優(yōu)化操作步驟指導(dǎo)。 |
| 大通量親和淘洗 | T7極其穩(wěn)定，在親和掏洗時(shí)可以采用各種試劑以將噬菌體從固相結(jié)合物上釋放下來(lái)，例如1% SDS，5 M NaCl，4 M尿素，2 M鹽酸胍，10 mM EDTA，100 mM DTT，pH 4-10。 |
| 高代表性文庫(kù)構(gòu)建與展示 | 采用包裝提取物和T7克隆試劑盒能輕易地構(gòu)建大的展示文庫(kù)。 |
| 有高、中、低拷貝表達(dá)供選擇 | 用戶可以根據(jù)表達(dá)和親和掏洗(蛋白結(jié)合)的具體要求方便地選擇相應(yīng)的高拷貝或低拷貝表達(dá)載體: T7Select系統(tǒng)提供多種在T7表面以高、中、低拷貝表達(dá)蛋白的T7噬菌體載體。*拷貝數(shù)(415-1載體為415拷貝)載體適合用于小、低親合力的結(jié)合域。低拷貝數(shù)(1-1b和1-2a-c載體為0.1-1拷貝)載體適合用于分析高親和力結(jié)合域。新推出的中拷貝展示載體(10-3)可以中等拷貝數(shù)展示(5-15)，使T7Select系統(tǒng)也可以用于分析中等親和力的結(jié)合。 |
| 節(jié)省經(jīng)費(fèi) | 試劑盒組成完整，價(jià)格合理(例如，T7Select OrientExpress Systems)，可以為用戶節(jié)省更多費(fèi)用。 |
| 展示廣譜的蛋白及多肽 | 有可以展示多肽或多達(dá)1200氨基酸的蛋白的載體供選擇 |
| 對(duì)蛋白類(lèi)型無(wú)限制 (與M13不同) | 可表達(dá)的蛋白的種類(lèi)比M13系統(tǒng)更多。T7展示的蛋白(或多肽)輸出無(wú)需經(jīng)過(guò)分泌途徑。像b-gal等之所以不能用M13這樣的絲狀噬菌體展示原因正在于此。序列非依賴(lài)型。 |
| 毒性蛋白問(wèn)題 | 可選擇高拷貝或低拷貝表達(dá) |
| 快速 | T7 生長(zhǎng)快，節(jié)約克隆和篩查時(shí)間，3小時(shí)內(nèi)即可形成噬斑。 |
| 完整的文庫(kù) | 包裝效率高，文庫(kù)代表性好。 |
| 更強(qiáng)大的蛋白展示功能 | 蛋白通過(guò)C-端融合表達(dá)而不是通常的N-端融合。插入片段被克隆到T7Select載體基因10 的C-端，因此，即使插入片段內(nèi)含有終止密碼子也可以被表達(dá)和展示。這在必須在N-端克隆的M13是無(wú)法進(jìn)行的。N-端融合克隆cDNA時(shí)常會(huì)造成麻煩，因?yàn)閜oly(A)區(qū)( cDNA中為oligo d(T))常位于翻譯終止密碼子的下游。
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