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脊髓動物細(xì)胞中特殊的RNAi現(xiàn)象

時(shí)間:2017/6/29閱讀:900
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1 .由長dsRNA引起的非特異性基因沉默
尋找哺乳動物細(xì)胞中存在RNAi的證據(jù)頗費(fèi)了一番周折。

將較長的dsRNA(超過30個(gè)堿基對)轉(zhuǎn)染幾種特定脊髓動物細(xì)胞系統(tǒng)如小鼠的早期胚胎中,斑馬魚和中華倉鼠卵巢細(xì)胞中,能夠誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)的RNAi現(xiàn)象,而在大部分脊髓動物的成體細(xì)胞中不存在類似于RNAi的機(jī)制,卻引起了非特異的基因表達(dá)抑制。這種抑制可能是激活了細(xì)胞的病毒防御機(jī)制,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)干擾素產(chǎn)生增多的緣故。而在未分化的胚胎細(xì)胞中,這種防御病毒的機(jī)制存在缺陷。

較長的dsRNA引起哺乳動物的成體細(xì)胞發(fā)生非特異阻斷基因表達(dá),是通過以下兩種機(jī)理進(jìn)行的:

1)蛋白激酶PKR的激活 PKR的活化依賴dsRNA的長度,PKR的*激活大約需80個(gè)核苷酸的dsRNA。激活的PKR使翻譯起始因子eIF-2a磷酸化而失活,導(dǎo)致翻譯抑制,進(jìn)而所有蛋白質(zhì)的合成受到抑制。

2)RNaseL的激活 較長的dsRNA也激活了2’,5’- AS (2’,5’- oligoadenylate synthetase, 2’,5’-AS),而2’,5’- AS又能活化細(xì)胞中處于潛伏狀態(tài)的RNaseL,后者被活化后可非特異地切割mRNA。

以上兩個(gè)結(jié)果zui終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

Tunschl研究組在試驗(yàn)中觀察到,較長的dsRNA轉(zhuǎn)入哺乳動物的成體細(xì)胞內(nèi)還可以產(chǎn)生可重復(fù)利用且序列特異的siRNA。他們推斷,dsRNA除能引起哺乳動物的成體細(xì)胞發(fā)生非特異阻斷基因表達(dá)外,至少還應(yīng)存在一種與之競爭利用dsRNA的途徑,即同時(shí)發(fā)生了與其它生物種屬一樣的特異性降解靶mRNA的RNAi效應(yīng)

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