16鼠黑色素瘤細胞。好像這株細胞還有亞型的,不過中科院說不清,我也就說不清了。總之是B16。
細胞總的來說比較好養(yǎng),操作基本都是常規(guī)的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培養(yǎng),一段時間為了省錢用過新生牛也不錯。但是傳代多了,細胞有形態(tài)改變??梢詶壍糁匦聫?fù)蘇。血清國產(chǎn)的杭州四季青,感覺不滅活比滅活要好養(yǎng)一些。
傳代操作,主要是無菌操作。細胞增殖快非常好養(yǎng),但是及時換液,否則也很容易死亡、或變形。消化用0.25%,可以用含EDTA的,效率更高一點。
消化步驟:棄血清——用D-hank's洗一遍,兩管就夠——加——鏡下觀察邊晃動——細胞開始變形即可——棄,不含EDTA者直接加含血清培養(yǎng)基也可——按次序吹打每個角落2-3遍——鏡下看成單細胞懸液(否則再吹)——棄去大部分(留1/4—1/8即可)——加適量培養(yǎng)基——繼續(xù)培養(yǎng)。
注意:不提倡據(jù)經(jīng)驗按消化時間來估計是否消化*。不同情況下細胞的消化時間不同,比如:的活力、的溫度、是否含EDTA、細胞的活力、細胞的密度等等。