1、原代培養(yǎng)：

健康成年白家兔空氣栓塞處死,立即取出眼球,1∶1000生理鹽水沖洗干凈,置超凈工作臺無菌操作。角膜緣剪開去除角膜、虹膜,將晶狀體前囊膜連同赤道部囊膜撕下,Hank液沖洗,剪成1mm×1mm小塊,上皮面向下置25mL組織培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁培養(yǎng)。把培養(yǎng)瓶輕輕翻轉(zhuǎn),加入適量的加入含15%胎牛血清的DNEM營養(yǎng)液,囊膜片在瓶內(nèi)的上面而培養(yǎng)液在下面。置于37℃、5%CO2、95%空氣、濕度的CO2培養(yǎng)箱中孵育4-6h左右,待囊膜片貼壁后再將培養(yǎng)瓶調(diào)回原位,此時培養(yǎng)液覆蓋囊膜片而不使囊膜片漂浮,每周換液2次。晶體上皮細(xì)胞在接種3天后,在倒置顯微鏡下可見,植塊邊緣有新生的細(xì)胞爬出,細(xì)胞呈規(guī)則六邊形,大小均勻,胞質(zhì)透明。一周后可融合成小片細(xì)胞。二周后可長滿融合成單層細(xì)胞。細(xì)胞多為類圓形、多角形。

2、傳代培養(yǎng)：

細(xì)胞鋪滿瓶底或生長到一定密度時,用0.25%消化,1∶2傳代培養(yǎng)。傳代時在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿底放置適當(dāng)大小的蓋玻片,細(xì)胞生長其上,便于光鏡及免疫組化觀察。細(xì)胞一般24h內(nèi)貼壁,約3～4d細(xì)胞可達融合,融合的細(xì)胞和原代相似,大小基本一致。傳代超過4～6代時,細(xì)胞的增長顯著下降,轉(zhuǎn)變成成纖維細(xì)胞形、三角形和長形。

3、個人體會：

晶狀體上皮細(xì)胞位于晶狀體前囊膜及赤道部囊膜下，單層排列，沒有其他細(xì)胞成分，是的單一細(xì)胞培養(yǎng)。但細(xì)胞數(shù)量少較難貼壁。所以采用先置于培養(yǎng)瓶待其貼壁后翻轉(zhuǎn)浸入培養(yǎng)液。另外要注意將囊膜剪小，上皮面向下，操作時有點難度的。培養(yǎng)基沒什么特別的，用小牛血清也可以，但生長較慢。一般把多個囊膜置于同一培養(yǎng)瓶加大組織密度，效果較好。個人認(rèn)為不用酶消化法，因為本來細(xì)胞就很少了。