urkat細(xì)胞（人外周血白血病T細(xì)胞）的傳代

時間：2014-11-5閱讀：1270

urkat細(xì)胞（人外周血白血病T細(xì)胞），是一種懸浮細(xì)胞。我的經(jīng)驗如下：

1、培養(yǎng)液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，100IU／1ml，100IU／ml；

2、培養(yǎng)條件：5％CO2，37度，30％濕度；

3、細(xì)胞復(fù)蘇：要快速將凍存管放入37度水中，不斷輕輕搖晃，直到細(xì)胞*溶解，加入10ml左右的培養(yǎng)液，800～1000rpm，10分鐘離心，之后倒掉液體，加入新的培養(yǎng)基就可以進(jìn)行培養(yǎng)了；

4、細(xì)胞培養(yǎng)：起初進(jìn)行傳代時由于細(xì)胞剛剛復(fù)蘇，長得比較慢，所以可以3～4天傳一代，傳過兩代后，一般2～3天傳一代，每次傳代后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，在傳過幾代合適的時候可以進(jìn)行實驗。

5、細(xì)胞凍存：1000rpm離心后，棄去液體，加入含有15％DMSO的凍存液，按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－80℃ 1小時）→液氮。

6、我在做細(xì)胞培養(yǎng)時的一些小經(jīng)驗：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)箱在每使用1個月用酒精擦洗一次，這樣可以減少污染；

（2）雖然說加樣器放在紫外下照射會不準(zhǔn)，但我們還是丟了一把1ml的加樣器在超凈臺，沒有拿出來過，我想這樣也許會減少污染；

（3）小牛血清我們用的是國產(chǎn)的，所以在一開始的時候加了15％的小牛血清，但細(xì)胞總是長不好，后來摸索條件，把小牛血清的量調(diào)到了20％，細(xì)胞生長旺盛；

（4）HEPES雖然貴點(diǎn)，但加上去后細(xì)胞會長的不錯；

（5）在超凈臺操作前要用0.1％的新潔爾滅或75%酒精擦手。

好看日韩在线视频免费,日本不卡一区二区三区,三级a全过程在线观看,亚洲精品国产9999久久久久