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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備及觀察

時(shí)間:2014-11-27閱讀:1457
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用骨髓細(xì)胞進(jìn)行染色體標(biāo)本的制備,不需要體外培養(yǎng),因此,不需無菌操作,整個(gè)過程所需時(shí)間短,方法比較簡(jiǎn)單,一般實(shí)驗(yàn)室均可進(jìn)行。

一、制作方法

1、取樣

將25g體重的蟾蜍用頸椎脫臼法殺死。殺死前2~3h,腹腔注射0.1%濃度的秋水仙素溶液(注射量以4μg/g體重計(jì)算)。殺死后,取每側(cè)的股骨和肱骨各一根,去凈外面的肌肉組織,剪去兩頭,用注射針頭吸入一些生理鹽水,將骨髓沖至一小培養(yǎng)皿中,反復(fù)幾次,將全部沖出物吸入離心管內(nèi)離心(1000轉(zhuǎn)/min)8min。

2、低滲處理

吸去上清液,加入在37℃中預(yù)熱的0.4%KCl溶液至5ml,用吸管輕輕吸動(dòng),使細(xì)胞松散,在37℃溫度,低滲20min,離心8min(100轉(zhuǎn)/min),在離心前加入1ml固定液作預(yù)處固定,防止細(xì)胞松散。

3、固定

吸去上清液,沾管壁加入甲醇∶冰醋酸=3∶1的的固定液5ml,固定5min后,用吸管將沉淀物輕輕打勻,再繼續(xù)固定30min離心8min(100轉(zhuǎn)/min)。 吸去上清液,再加固定液固定一次,用吸管打散靜止15~20min,離心8min(1000轉(zhuǎn)/min)吸去上清液,留沉淀物,再加少量固定液混勻,即可制片。

4、 制片及染色

從冰箱中取出預(yù)冷玻片,平置在手中,然后,將標(biāo)本混勻液從一定的高處滴下,并立即用口吹散,在酒精燈上加熱干燥。干燥后,將稀釋10倍的Giemsa染液(用前稀釋)滴于玻片上,染色20~30min,流水沖洗幾秒鐘,在酒精燈上干燥后,即可置于顯微鏡下觀察。

二、觀察

在高倍顯微鏡下觀察蟾蜍骨髓淋巴細(xì)胞的染色體。我們可能看到有11對(duì)(2n=2×11=22)等臂的染色單體,每一條都呈V字形?;拘螒B(tài)如下圖。在顯微鏡下,染成紅色的為染色體和著絲粒,染成淺藍(lán)色的為細(xì)胞質(zhì),染色單體沒有著絲縊痕和次縊痕。

三、Giemsa 染液的配制:

1、Giemsa原液的配制(1ml)

Giemsa粉劑0.5g、甘油(A·R)33ml、甲醇(不含丙酮)(A·R)33ml。   將少量甘油中加入粉劑,用研缽磨至無顆粒為止,再加入全部甘油33ml,放56℃溫箱中2h溶化后加甲醇33ml,搖勻后保存于棕色瓶中,用時(shí)稀釋10倍。

2、磷酸緩沖液(pH=7)的配制

取1/15M磷酸二氫鉀溶液38.8ml和1/15M溶液61.2ml混合后,即可得pH=7的磷酸緩沖液

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