在分子生物學(xué)研究中,基因克隆和分子雜交的探針制備等操作常需分離與已知DNA序列鄰近的未知序列，TAIL-PCR又叫熱不對稱交錯(cuò)PCR，能夠較好地解決上述難題。該技術(shù)通過3個(gè)嵌套的特異性引物分別和簡并引物組合進(jìn)行連續(xù)的PCR循環(huán)，利用不同的退火溫度選擇性地?cái)U(kuò)增目標(biāo)片段，所獲得的片段可以直接用做探針標(biāo)記和測序模板。

TAIL-PCR技術(shù)簡單易行，反應(yīng)靈敏，產(chǎn)物的特異性高，重復(fù)性好，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)獲得目標(biāo)片段，已經(jīng)成為分子生物學(xué)研究中的一種實(shí)用技術(shù)。經(jīng)改良過的TAIL-PCR成功地從突變體中克隆到外源插入基因的旁側(cè)序列，從而為啟動(dòng)子的克隆提供了有效的新方法。 

在利用特異引物和隨機(jī)引物進(jìn)行PCR中一般有3種產(chǎn)物生成：
①由特異性引物和簡并引物擴(kuò)增出的產(chǎn)物；
②由同一特異性引物擴(kuò)增出的產(chǎn)物；
③由同一簡并引物擴(kuò)增出的產(chǎn)物。

在TAIL-PCR反應(yīng)中，其中后2種目標(biāo)產(chǎn)物可以通過以嵌套的特異性引物進(jìn)行的后續(xù)反應(yīng)來消除。TAIL-PCR的基本原理是利用目標(biāo)序列旁的已知序列設(shè)計(jì)3個(gè)嵌套的特異性引物（special primer，簡稱sp1，sp2，sp3，約20bp），用它們分別和1個(gè)具有低Tm值的短的隨機(jī)簡并引物（arbitrary degenerate prime，AD，約14bp）相組合，以基因組DNA為模板，根據(jù)引物的長短和特異性的差異設(shè)計(jì)不對稱的溫度循環(huán)，通過分級反應(yīng)來擴(kuò)增特異引物。TAIL-PCR共分3次反應(yīng)。

*次反應(yīng)包括5次高特異性、1次低特異、10次較低特異性反應(yīng)和12個(gè)熱不對稱的超級循環(huán)。5次高特異性反應(yīng)，使sp1與已知的序列退火并延伸，增加了目標(biāo)序列的濃度；1次低特異性的反應(yīng)使簡并引物結(jié)合到較多的目標(biāo)序列上；10次較低特異性反應(yīng)使2種引物均與模板退火，隨后進(jìn)行12次超級循環(huán)。經(jīng)上述反應(yīng)得到了不同濃度的3種類型產(chǎn)物：特異性產(chǎn)物①型和非特異性產(chǎn)物（②型和③型）。

第二次反應(yīng)則將*級反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋1000倍作為模板，通過10次熱不對稱的超級循環(huán)，使特異性產(chǎn)物被選擇地?cái)U(kuò)增，而非特異產(chǎn)物含量極低。第三次反應(yīng)又將第二次反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋作模板，再設(shè)置普通的PCR反應(yīng)或熱不對稱超級循環(huán)，通過上述3次PCR反應(yīng)可獲得與已知序列鄰近的目標(biāo)序列。