佛手染料法PCR鑒定試劑盒陽性對(duì)照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱的幾個(gè)問題:
、不當(dāng)儲(chǔ)存或儲(chǔ)存引起試劑活性喪失。
2、加入組織裂解液過量。
3、樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久,DNA基因組已經(jīng)降解。
4、模板加入量不適合。
5、PCR循環(huán)數(shù)不足。
解決方法:
、使用新鮮的試劑。
2、增大反應(yīng)體系,或減少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天,盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4、在反應(yīng)體系0-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí),可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于0%的范圍。
5、適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù),在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟0鍙?fù)雜,一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-0個(gè)循環(huán)為佳。
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