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人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法與檢測程序方法

時間:2022/1/19閱讀:397
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人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法:


1. 將450ul 標本稀釋液加入到一支 1.5ml 進口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血漿標本。


2. 加20ul 1 N HC I ,蓋緊,上下混勻。 2 - 8 ℃ 放置60± 2 分鐘。


3. 加20ul 1 N NaOH, 蓋緊,上下混勻。


4. 即用,或放-20/-70 ℃ 保存3 天。計算結(jié)果時乘 以稀釋倍數(shù) 50 。 ( 注意:不同的標本E2F1 的水平可能有較大差異,請根據(jù)實際情況靈活掌握稀釋度)


5. 細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋 (410ul 的標本稀釋液+ 50ul 樣本+ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。


檢測程序


1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活) 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。


2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。


3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。


4. 洗板:同前。


5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。


6. 洗板:同前。


7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。


8. 每孔加入100ul 終止液混勻。


9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

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