可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋I）試劑盒產(chǎn)品說明書

【資料簡介】

 

可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋I）試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋I）試劑是一種旨在使用化學(xué)稀釋方法，使可溶性變性純化蛋白重新折疊，恢復(fù)其蛋白功能和活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種可溶性純化蛋白，尤其是細菌內(nèi)重組蛋白（融合蛋白）以及可溶性處理的包涵體蛋白。可后續(xù)用于蛋白功能、酶活性等分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，操作便捷，復(fù)性效果理想。

 

技術(shù)背景

 

在蛋白純化和融化過程中，特別是包涵體蛋白，變性劑（denaturant）提供了zui有效的手段，其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白（denatured protein）。為了使變性蛋白恢復(fù)為天然蛋白（native protein），即具有蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)和活性，需要進行蛋白復(fù)性（renaturation）或重新折疊（refolding）。蛋白復(fù)性是一個復(fù)雜的過程，諸如pH、離子強度、低分子添加劑、氧化還原電位（redox potential）和溫度等物化因子，影響體外蛋白復(fù)性的效率。通常體外復(fù)性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過化學(xué)處理，而后者采用物理方法（例如透析、膜過濾（diafiltration）、凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）等，以達到蛋白復(fù)性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜堿（sulfobetaine）、去垢劑、變性劑等將影響化學(xué)稀釋復(fù)性處理的效率。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

稀釋液（Reagent A）   10毫升

還原液（Reagent B）       5毫升

平衡液（Reagent C）       5毫升

產(chǎn)品說明書 1份

 

保存方式

保存在-20℃冰箱里， 避免光照，有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

恒溫搖床：用于反應(yīng)孵育

 

實驗步驟

 

方法一：還原復(fù)性

• 準備好可溶性純化變性蛋白樣品
• 移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管
• 加入適量的稀釋液（Reagent A）調(diào)整蛋白濃度到10毫克/毫升
• 移取100微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管
• 加入900微升還原液（Reagent B）
• 放進20℃恒溫搖床孵育4小時，速度為200RPM
• （選擇步驟）移取10微升進行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結(jié)合實驗等確定復(fù)性蛋白活性值
• 即刻放進－70℃冰箱里保存

 

方法二：平衡復(fù)性

 

1．準備好可溶性純化變性蛋白樣品

2．移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管

• 加入適量的稀釋液（Reagent A）調(diào)整蛋白濃度到5毫克/毫升
• 移取5微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管
• 加入195微升平衡液（Reagent C）
• 放進28℃恒溫搖床孵育2小時，速度為200RPM
• （選擇步驟）移取10微升進行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結(jié)合實驗等確定復(fù)性蛋白活性值
• 即刻放進－70℃冰箱里保存

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為5次操作（還原和平衡各5次）
• 操作時須戴手套
• 本產(chǎn)品的復(fù)性效率達15至30％
• 建議與本公司系列包涵體蛋白溶解試劑盒配套使用
• 由于樣品的特異性，用戶可以優(yōu)化溫度、孵育時間、蛋白濃度，以獲得zui大復(fù)性效率
• 如果復(fù)性效率過低，建議使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性（物理透析）試劑盒－HL30044.5
• 如果獲得滿意的復(fù)性效果，用戶可以按比例擴大復(fù)性容量
• 本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無蛋白酶污染