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Percoll 細(xì)胞分離液1L原裝(Pharmacia) 編號(hào):17-0891-01

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更新時(shí)間:2022-08-03 13:42:16瀏覽次數(shù):630次

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Percoll 細(xì)胞分離液1L原裝(Pharmacia) 編號(hào):17-0891-01

 名稱:*現(xiàn)貨|Percoll

貨號(hào):17-0891-01
規(guī)格:1L原裝
產(chǎn)地:Pharmacia

(一) 原理
Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。此外,Percoll不穿透生物膜,對(duì)細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達(dá)1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。
(二)操作方法及注意事項(xiàng)
1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
Percoll濃度(%)  70    60    50    40    30     20
比重g/ml    1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過大,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。
3.有時(shí)大部分細(xì)胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測(cè)用。取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞;
4.不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下,有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí),可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
5.離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢,要平穩(wěn)。

  (三)分離純化細(xì)胞舉例
1.富含NK活性大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五種不同密度的Percoll,如用10ml試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2~1.5ml,初步從外周血中分離的PBMC細(xì)胞1×108懸于1ml培基中,按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細(xì)胞位于42.5%與45%Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。

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