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細(xì)胞培養(yǎng)中會(huì)沉淀如何產(chǎn)生的呢?產(chǎn)生沉淀什么原因造成的,您知道嗎?跟著勁馬小編一起來研究研究!
細(xì)胞培養(yǎng)中的沉淀
如果排除了污染,細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細(xì)胞健康,因?yàn)樗麄兺ㄟ^螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分,從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的,可能會(huì)干擾依賴成像的實(shí)驗(yàn)分析。
產(chǎn)生沉淀的可能原因
一、溫度變化
在細(xì)胞培養(yǎng)中,溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的變化時(shí),高分子量血漿蛋白會(huì)從溶液中析出;熱失活和凍融循環(huán)能促進(jìn)蛋白降解和沉淀;因?yàn)橐后w或重組成培養(yǎng)基在使用之間保持冷藏儲(chǔ)存,鹽可能沉淀,尤其是10x或其他濃縮的儲(chǔ)存液。
二、失水誘導(dǎo)的濃度改變
如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā),培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會(huì)增加,特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。
三、鈣鹽
制備無血清培養(yǎng)基時(shí),組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會(huì)加劇這一問題。
四、金屬補(bǔ)充物
銅、鐵和鋅等金屬離子是細(xì)胞生長所必需的,是無血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀,為細(xì)胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時(shí)),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀。
金屬沉淀物顏色表
五、污染
培養(yǎng)物渾濁可能是細(xì)菌或真菌污染造成的。
細(xì)胞培養(yǎng)沉淀的常見原因和解決方案
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