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流式胞內(nèi)染色步驟
(使用FIX & PERM固定破膜)
制備好細(xì)胞懸液,取100ul
(全血樣本:人100ul,小鼠30~50ul)
染表面抗體,室溫避光孵育15min,不用洗滌
↓
加入FIX&PERM Reagent A 100ul室溫孵育15min
↓
加入3ml流式染色緩沖液(Flow Cytometry Staining Buffer)
300g 離心5min 棄上清收集細(xì)胞
液體盡量倒干凈,不要?dú)埩?/span>
↓
渦旋混勻沉淀,加入FIX&PERM Reagent B
100ul和胞內(nèi)抗體
(同型對照管加入同等劑量的抗體)
混勻,室溫避光孵育20min
↓
加入3ml流式染色緩沖液,300g離心5min棄上清收集細(xì)胞
↓
用0.5ml 流式染色緩沖液重懸后立即上機(jī)。
或者加入0.5ml 0.1~4%多聚甲醛避光4℃保存24小時(shí)內(nèi)上機(jī)分析