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養(yǎng)娃要悉心照料,同樣養(yǎng)細胞也需要無微不至的關(guān)懷,各種吃的穿的用的,更是一樣都不能少,為了這些“可愛”的細胞們,不知道有多少生物醫(yī)學(xué)科研人操碎了心。
這不,zui近養(yǎng)的好好的細胞,這狀態(tài)說差就差了,還不是細胞污染的原因,這究竟是什么情況?
細胞培養(yǎng)基中的渾濁,究竟是什么?
如果排除了污染,細胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細胞健康,因為它們通過螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分,從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的,可能會干擾依賴成像的實驗分析。
產(chǎn)生沉淀的可能原因
一、溫度變化
在細胞培養(yǎng)中,溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的變化時,高分子量血漿蛋白會從溶液中析出;熱失活和凍融循環(huán)能促進蛋白降解和沉淀;因為液體或重組成培養(yǎng)基在使用之間保持冷藏儲存,鹽可能沉淀,尤其是10x或其他濃縮的儲存液。
二、失水誘導(dǎo)的濃度改變
如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā),培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會增加,特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。
三、鈣鹽
制備無血清培養(yǎng)基時,組分添加的順序可能導(dǎo)致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會加劇這一問題。
四、金屬補充物
銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長所必需的,是無血清培養(yǎng)基的重要補充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導(dǎo)致這些金屬沉淀,為細胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀。
金屬沉淀物及對應(yīng)顏色:
硫化亞銅(I):黑色
氧化銅(I):黑色
氧化亞鐵(I):黑色
硫化亞鐵(II):黑色
氫氧化銅(II):藍色
磷酸亞鐵(II):藍色
胱氨酸亞銅:藍-灰色
碳酸銅(II):藍-深綠色
氯氧化銅(II):藍-綠色
醋酸鐵(III):棕色
碳酸鈣:無色
氫氧化鋅:無色
磷化亞銅(I):灰-黑色
氧化鎂:灰-綠色或棕-黑色
三氧化二鐵(III):紅-黑色
氫氧化鐵(III):紅-棕色
碳酸錳:玫瑰色
磷酸鋅:灰色
磷酸鈣:白色
磷酸鎂:白色
氫氧化鎂:白色
過氧化鎂:白色
焦磷酸鎂:白色
碳酸鋅:白色
氧化鋅:白色
硫化鋅:白色
碳酸亞銅(I):黃色
氫氧化亞銅(I):黃色
過氧化鋅:黃色
五、污染
培養(yǎng)物渾濁可能是細菌或真菌污染造成的。
細胞培養(yǎng)沉淀的常見原因和解決方案